磷脂转运蛋白低表达对巨噬细胞炎症因子的表达的影响及分子机制

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1、圆硕士学位论文IIIIIIIIMIIUIIIWF2809090论文题目：磷脂转运蛋白低表达对巨噬细胞炎症因子的表达的影响及分子机制作者姓名：刘帅学科、专业：病理学与病理生理学学位类型：科学学位研究方向：脂质代谢与动脉粥样硬化指导教师：秦树存教授入学时间：2010年9月论文工作起止时间：2011年7月～2013年2月目录中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯1英文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯·5符号说明⋯⋯·—1上．—jL

2、-刖舌⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯··14结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯“⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯··40讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯·42结论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯·45附表⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯·46

3、参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯·53综j苤⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯”⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯··57致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯·69原创性声明⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯“＼㈣嬲磷脂转运蛋白低表达对巨噬细胞炎症因子表达的影响及分子机制研究生：刘帅专业：病理学与病理生理学导师：秦树存教授中文摘要目的炎症(inflammation)在人类多种重要疾病的发生

4、和发展过程中起着关键的作用。巨噬细胞(macrophage)作为一种免疫细胞，在炎症的多个环节起到重要作用。核转录因子r．B(nucleusfactorkappa-B，NFrB)是巨噬细胞参与的炎症信号通路中最重要的转录因子之一，它的激活能引起多种炎症因子如白细胞介素(interleukin)、肿瘤坏死因子a(tumornecrosisfactorQ，TNF一伐)等表达升高。磷脂转运蛋圭t(phospholipidtransferprotein，PLTP)参与炎症发生发展过程，PLTP能结合、转运以及中

5、和脂多糖(1ip．polysaccharide，LPS)，PLTP缺乏dx鼠(PLTP-／一)在致死剂量的内毒素血症时血浆炎症因子表达升高，器官损伤加重，死亡率增加。该过程中高表达的炎症因子均受NFr．B调控，且在巨噬细胞内均有表达，提示上述炎症因子表达升高很可能与巨噬细胞NFr．．B激活相关。本研究拟采用多种巨噬细胞为模型，探讨PLTP低表达或不表达对LPS刺激的影响及可能的分子机制。方法1、小鼠繁育，PLTP敲除杂合子为亲代，繁育出子代经基因型鉴定得到纯合子PLTP．／．及同窝出生野生型小(wild

6、typemic，WT)。从中选取雄性WT和PLTP-／．各8只。2i小鼠第八周龄时，提取LPS诱导的腹腔巨噬细胞，分离骨髓进行原代培养，并添加含集落刺激因子的Lcell培养基进行诱导。培养十天左右，骨髓源性巨噬细胞(bonemalTOWderivedmacrophage，BMDM)诱导完成。3、培养巨噬细胞模型RAW264．7、人脐静脉上皮细胞(Humanumbilicalveinepithelialcell，HUVEC)，分为三组分别为空白组(标记为blank)、对照组(标记为ControlsiRNA

7、)和实验组(标记为PLTPsiRNA)。4、将WT和PLTP．／．BMDM两种细胞分别在不同的时间段(分别为0．5h，lh，2h)给予LPS(浓度为200ng／m1)刺激。5、将PLTPsiRNARAW264．7在不同的时间段(分别为O．5h，lh，2h)给予LPS(浓度为200ng／m1)刺激。6、将PLTPsiRNAHUVEC在不同的时间段(分别为O．5h，lh，2h)给予TNF-0【(浓度为20ng／m1)刺激。7、WesternBlot检测与NFr．B信号通路相关蛋白；NFr．_B活性亚单位p6

8、5、胞浆内抑制亚单位Iv／3．a、信号转导及转录激活因子3(Signaltransducersandactivatorsoftranscription3，STAT3)及其磷酸化蛋f兰t(pSTAT3)、转录生长因子激酶1(transformgrowthfactoractivatedkinase1，TAKl)及其磷酸化蛋白(pTAKI)，核蛋白内参H3以及胞浆蛋白内参甘油醛-3-磷酸脱氢酶(glyceraldehyde-3-phosphate