pten干扰促进肺泡巨噬细胞炎症因子的表达

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1、分类号：密级：UDC：学号：406521812537南昌大学硕士研究生学位论文PTEN干扰促进肺泡巨噬细胞炎症因子的表达PTENinterferencepromotetheexpressionofinflammatoryfactorinalveolarmacrophages邓文刚培养单位（院、系）：南昌大学第一附属医院指导教师姓名、职称：钱克俭教授申请学位的学科门类：医学学科专业名称：急诊医学论文答辩日期：2015年5月答辩委员会主席：评阅人：2015年5月I一、学位论文独创性声明本人声明所呈交的学位论文

2、是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得南昌大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名（手写）：签字日期：年月日二、学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解南昌大学有关保留、使用学位论文的规定，同意学校有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权南昌

3、大学可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编本学位论文。同时授权北京万方数据股份有限公司和中国学术期刊（光盘版）电子杂志社将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》和《中国优秀博硕士学位论文全文数据库》中全文发表，并通过网络向社会公众提供信息服务，同意按“章程”规定享受相关权益。学位论文作者签名（手写）：导师签名（手写）：签字日期：年月日签字日期：年月日论文题目姓名学号论文级别博士□硕士□院/系/所专业E_mail备注：□公开□保密（向校学位办申

4、请获批准为“保密”，年月后公开）I摘要摘要目的：观察转染PTEN干扰RNA（PTENsiRNA）对脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）诱导的大鼠肺泡巨噬细胞（NR8383）肿瘤坏死因子-α（tumornecrosisfactor-α,TNF-α）表达的影响，探讨PTEN对肺泡巨噬细胞炎症反应的调控作用及可能机制。方法：1.体外培养NR8383，将细胞分成两组：对照组转染ControlsiRNA，干扰组转染PTENsiRNA，分别选取10nM、20nM、40nM浓度转染24小时，采用实时荧

5、光定量逆转录-聚合酶链反应（Realtimefluorescentquantitativereversetranscriptasepolymerasechainreaction,RT-qPCR）检测转染后两组细胞中PTENmRNA表达，采用蛋白质印迹法（westernblot）检测转染后两组细胞内PTEN蛋白表达。优化转染条件，选择20nM为最佳实验转染浓度。2.将NR8383细胞分成两组：对照组转染ControlsiRNA，干扰组转染PTENsiRNA，转染24小时后，两组细胞分别用终浓度1μg/mlL

6、PS刺激细胞6小时，采用RT-qPCR检测两组细胞内TNF-αmRNA表达，采用westernblot检测两组细胞内AKT磷酸化水平，采用酶联免疫吸附实验（Enzymelinkedimmunosorbentassay,ELISA）检测两组细胞培养上清液中TNF-α蛋白的表达变化。结果：1.与对照组比较，10nM、20nM和40nM干扰组PTENmRNA表达分别下调至（0.33±0.01）倍（P<0.01）、（0.23±0.01）倍（P<0.01）、（0.21±0.01）倍（P<0.01）；PTEN蛋白表达

7、分别下降至（0.30±0.03）倍（P<0.01）、（0.14±0.02）倍（P<0.01）、（0.10±0.02）倍（P<0.01）；在干扰组中，与10nM浓度比较，20nM、40nM浓度PTEN蛋白表达有统计学差异（P<0.01）。20nM与40nM浓度比较，PTEN蛋白表达差异无统计学意义（P=0.08）。2.两组细胞LPS刺激6小时后，与对照组比较，p-AKT/AKT蛋白比值从（0.26±0.02）表达上升至（0.52±0.03）倍（P<0.01），干扰组细胞中TNF-αmRNAII摘要表达上调至

8、（1.56±0.18）倍（P<0.01）。ControlsiRNA+LPS对照组细胞上清液TNF-α蛋白表达量为1632.56±52.05pg/ml，PTENsiRNA+LPS干扰组细胞上清液TNF-α蛋白表达量为1834.07±57.00pg/ml（P＜0.05）。结论：转染PTENsiRNA入NR8383细胞后，可上调AKT磷酸化水平，促进LPS诱导肺泡巨噬细胞TNF-α的表达。因此，我们推测PTEN可能通过PI3K-AK