穿心莲内酯对巨噬细胞炎症因子表达的影响

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1、穿心莲内酯对巨噬细胞炎症因子表达的影响：李明,陈伟强,胡太平,张丽蓉,蔡尤彪,古宏标【摘要】目的研究穿心莲内酯对小鼠巨噬细胞氧化亚氮(NO)、肿瘤坏死因子(TNF?α)和白细胞介素?6(IL?6)生成的影响。方法培养小鼠巨噬细胞RAethodsAmacrophagecelllineRAEM培养基(美国Gibco公司);酶标仪(美国Bio?Rad公司)。　　1.2细胞培养及干预实验　　小鼠巨噬细胞RAEM培养基(含体积分数10%胎牛血清、质量浓度100U/mL青霉素和100μg/mL链霉素)，体积分数5%CO2，37℃条件下传代培养。取生长

2、状态良好的RAEM培养基调整细胞浓度为1×106/mL，接种到24孔培养板内，待细胞生长至80%融合后，加入不同浓度的穿心莲内酯(终浓度分别为1、10、50μmol/L)孵育1h，然后加入LPS(终质量浓度1μg/mL)进行刺激。实验分组：正常对照组、穿心莲内酯单独作用组、LPS组和穿心莲内酯加LPS组。　　1.3NO浓度测定　　细胞加入刺激物后培养24h，收集各处理组细胞培养上清液，用硝酸还原酶法检测炎性介质NO的浓度。操作步骤按试剂盒说明书完成。　　1.4细胞因子浓度测定　　细胞加入刺激物后继续培养24h，收集各处理组细胞培养上清液，

3、用TNF?α和IL?6Elisa试剂盒检测上清液中细胞因子的含量。操作步骤按试剂盒说明书完成。　　1.5统计分析　　所有数据以±s表示，采用SPSS11.0统计软件对实验结果进行Student’st检验，P<0.05为差异有显著性。　　2结果　　2.1穿心莲内酯对LPS诱导巨噬细胞NO生成的影响　　收集24h细胞培养上清，用Griess法测定细胞上清中NO的含量。结果见表1。结果显示，50μmol/L穿心莲内酯单独作用并不影响巨噬细胞NO的表达(与正常对照组比较，P>0.05);1μg/mLLPS刺激可以显著诱导巨噬细胞RAa

4、ntovani在Nature杂志上提出，与无限制性生长、转移等特征一样，炎症性微环境与肿瘤关系密切，并认为炎症是肿瘤的7大重要标志之一[2]。　表2穿心莲内酯对TNF?α和IL?6表达的影响　　与正常对照组比较：**P<0.01;与LPS组比较：#P<0.05，##P<0.01目前，国内外研究者都在积极寻找抗炎药物，对心血管疾病和肿瘤进行防治研究工作[1,7-8]。我国传统中药，尤其是清热解毒中药很多具有抗炎作用，发挥中药资源在抗炎症方面的优势，寻找有效的抗炎中药，防治危害人类健康的重大疾病是中药现代化开发的需要。穿心莲

5、内酯是清热解毒代表中药穿心莲的主要药效成分。以往研究证实，穿心莲内酯有显著的抗炎活性，能抑制二甲苯和醋酸所致的小鼠毛细血管通透性增加，还对大鼠蛋清蛋白、角叉菜胶足趾注射致炎模型有明显的抗炎作用[3]，但对其细胞及分子机制并不清楚。本研究以穿心莲内酯为研究对象，初步观察了其对炎症因子NO、TNF?α和IL?6表达的影响。实验结果显示，LPS刺激可以诱导巨噬细胞大量表达炎症因子NO、TNF?α和IL?6，而穿心莲内酯预处理则可以减轻LPS引起的炎症反应，减少巨噬细胞炎症因子的表达。有研究显示穿心莲内酯可以阻碍NF?κB与DNA的结合，抑制NF

6、?κB下游基因的转录[9]。iNOS、TNF?α、IL?6等基因的表达都受到NF?κB的调控，因此推测穿心莲内酯抑制炎症因子表达可能与降低NF?κB信号分子活性有关。本研究结果显示，穿心莲内酯能降低LPS诱导的巨噬细胞炎症因子NO、TNF?α和IL?6生成，抑制炎症反应，为穿心莲内酯应用于动脉粥样硬化、肿瘤等炎症相关性疾病的治疗提供了理论基础。【