rhoarock信号通路在高糖诱导大鼠肝星状细胞增殖和转分化中的作用

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2、本论文是在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果，除了文中特别加以标注和致谢等内容外，文中不包含其他人已经发表或撰写的研究成果，指导教师对此进行了审定。本论文由本人独立撰写，文责自负。研究生签名：叫萝导师签章：I司；。功枣年3月珂日万方数据目录啪?帆2㈣78㈣5删帆8吣1矾4唧中文摘要．1英文摘要4英文缩写7研究论文RhoA／ROCK信号通路在高糖诱导大鼠肝星状细胞增殖和转分化中的作用前言日IJ吾．．8．．8材料与方法．9结果．16附图18讨论．22结论．24参考文献一24综述肝纤维化的发病机制和非酒精性脂肪性肝病的研究进展．28致谢43个人简历44万方数据中文

3、摘要RhoA／ROCK信号通路在高糖诱导大鼠肝星状细胞增殖和转分化中的作用摘要目的：糖尿病可引起非酒精性脂肪性肝病，如不加以干预，常进展为肝纤维化、肝硬化，目前糖尿病性肝纤维化的发病机制尚不完全清楚，肝星状细胞(hepaticstellatecells，HSCs)的激活、转分化是纤维化发生的核心环节。我们通过在体外高糖条件下培养大鼠肝星状细胞，探讨RhoA／ROCK通路在高糖刺激肝星状细胞增殖和转分化中的作用及ROCK对MAPKs通路的调控作用，旨在为临床糖尿病肝纤维化提供新的治疗靶点。方法：购买SD大鼠肝星状细胞株HSC．T6进行体外培养并用无血清培养基同步化2

4、h，实验设为对照组(NG：含5．5mmol／L葡萄糖)、高糖组(HG：含25mmol／L葡萄糖)、高渗透压组(HOSM：5．5mmol／L葡萄糖+19．5mmol／L甘露醇)、HG+法舒地尔组(12．5、25、50gmol／L)。应用MTS法测定肝星状细胞的增殖；免疫细胞化学染色测定仅平滑肌肌动蛋白(0【一smoothmuscleactin，仪．SMA)表达程度；应用Westernblot方法分别检测肌球蛋白磷酸酯酶靶点亚单位1(MYPTl)、细胞外信号调节激酶(EtⅨ1／2)、c—Jun氨基末端激酶(JNK)和p38MAPK的磷酸化水平及总蛋白表达。结果：1高糖

5、和法舒地尔对肝星状细胞增殖的影响从MTS结果可知：对照组的吸光度值为1．491+0．058，高糖组的吸光度为1．866+0．083，较对照组增加了20．1％(尸

6、地尔能够浓度依赖性地抑制高糖诱导的肝星状细胞增殖，单纯高渗透压状态对细胞增殖没有影响。万方数据中文摘要2高糖和法舒地尔对肝星状细胞内oc．SMA合成的影响通过免疫细胞化学染色法观察肝星状细胞中0【．SMA的阳性表达率。在染色阳性的细胞内可见胞核呈空泡状，核周胞浆处有黄褐色至棕褐色颗粒呈片状分布。对照组可见少量细胞微弱表达仅．SMA，平均阳性表达率为11+0．540一％，高渗透压组为13+0．852％，两者比较差异无统计学意义(尸>O．05)；高糖组的细胞染色呈强阳性，0【．SMA阳性表达率为31+0．332％，明显高于对照组(尸<0．01)；在高糖中加入不同浓度的

7、法舒地尔，其0t—SMA较单纯高糖组均明显下降(尸

8、计学意义(