MicroRNA-346在高糖诱导的足细胞转分化中的作用.pdf

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1、AthesissubmittedtoZhengzhouUniversityforthedegreeofMasterImpactofMicroRNA··346onglucose·-inducedepithelial—mesenchymaltransitioninMicePodocyteByWenJuJiaoSupervisor：Prof．ZhanzhengZhaoDepartmentofNephrologyTheFirstAffiliatedHospitalofZhengzhouUniversityApril2014原创

2、性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的科研成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本声明的法律责任由本人承担。学位论文作者：丝∥乱手日期：2。14年，月3。同学位论文使用授权声明本人在导师指导下完成的论文及相关的职务作品，知识产权归属郑州大学。根据郑州大学有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留或向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅；本

3、人授权郑州大学可以将本学位论文的全部或部分编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或者其他复制手段保存论文和汇编本学位论文。本人离校后发表、使用学位论文或与该学位论文直接相关的学术论文或成果时，第一署名单位仍然为郑州大学。保密论文在解密后应遵守此规定。学位论文作者：钨丈军日期：2014：年5’月30日摘要MicroRNA．346在高糖诱导的足细胞转分化中的作用硕士研究生：焦文举导师：赵占正教授郑州大学第一附属医院内科学(肾病)河南郑州450052研究背景糖尿病肾病(diabeticnephropathy,DN)是糖尿

4、病最常见的微血管并发症之一，发病率呈逐年递增的趋势，由此而导致的终木期肾脏病(end．stagerenaldisease，ESIm)的发病率也越来越高。DN发病机制仍不十分明确，涉及体内多种蛋白、多条细胞信号通路的改变。DN的主要临床表现为蛋白尿、继发肾小球硬化、肾脏纤维化。足细胞作为一种高度分化的细胞，在维持肾小球滤过膜的完整性方面具有重要的生理意义。大量研究表明：足细胞受损是肾小球损伤的中心环节，多种理化、生物因素均可影响足细胞的功能，从而导致蛋白尿的发生。microRNA(miRNA)是近年发现的一种内源性、非编

5、码小RNA，与其靶基因3’非翻译区(3’．UTR)的碱基互补配对，从而在转录后水平导致mRNA的降解或抑制，发挥负性调控作用。miRNA在生物的发育分化，细胞增殖、凋亡，及器官形成及疾病发生中发挥至关重要的作用。近年的研究表明miRNA可能参与了DN的发生发展，但其具体机制不详，需要进一步深入研究。近年来有少数研究表明miR．346可以通过调节GSK．3D并激活Wnt／D．Catenin通路调节人骨髓间充质干细胞的转分化，然而在高糖培养足细胞中miR-346的表达及其功能目前仍不明确。GSK．3D是一种丝／苏氨酸蛋白激

6、酶，是细胞转分化三条通路中一个重要的调控因子，在通路中起着承上启下的作用，我们前期的研究已经表明，GSK．3D参与了高糖环境下足细胞的转分化，miR．346能否通过调节GSK．3p从而影响高糖诱导的足细胞转分化，有待于进一步的研究。摘要目的本研究通过检测不同糖浓度环境中小鼠足细胞miR．346表达，观察转染miR-346mimic和miR-346inhibitor对足细胞表型的影响，旨在探讨miR．346是否参与了高糖导致的足细胞转分化，并验证这种作用是否通过GSK-3p介导，从而初步探讨miR．346在DN早期发生、

7、发展中所起的作用，为DN发生机制及治疗措施的研究提供一定的理论依据。方法1．不同浓度的葡萄糖中足细胞miR．346的表达变化，以不同浓度葡萄糖(12．5mmol／L，25mmol／L)培养足细胞36h，并含『F常对照组(5．6mmol／L葡萄糖)和高渗对照组(5．6mmol／L葡萄糖+44．4mmol／L甘露醇)，应用RT-PCR检测足细胞miR．346表达。2．利用miR．346mimic／inhibitor转染高糖(25mmol／L葡萄糖)培养足细胞，并设高糖对照组(25mmol／L葡萄糖)。应用Western-b

8、lot检测足细胞表面标记蛋白nephrin，间充质细胞表面标记蛋白Gt．SMA。3．构建GSK．3DmRNA37．UTR及miR．346荧光素酶报告质粒，共转染293T细胞，双荧光素酶活性检测验证GSK．3pmRNA的37．UTR与miR．346有无直接结合。4．利用miR一346mimic／inhibitor转染(5．6mmol