galectin-1在高糖诱导人足细胞损伤中的作用

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1、中图分类号R692．6UDC610硕士学位论文学校代码!Q蔓三三密级公珏Galectin．1在高糖诱导人足细胞损伤中的作用TheRoleofGalectin-·1ontheInjureofHumanPodocyteCellsInducedbyHighGlucose作者姓名：学科专业：研究方向：学院(系、所)：指导教师：论文答辩日期龙露平临床医学内科学湘雅二医院刘映红副教授阀力；f馨辩委员会主席中南大学二O一三年五月原创性声明本人声明，所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了论文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰

2、写过的研究成果，也不包含为获得中南大学或其他单位的学位或证书而使用过的材料。与我共同工作的同志对本研究所作的贡献均已在论文中作了明确的说明。作者签名：日期：j业年与兰日学位论文版权使用授权书本人了解中南大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留学位论文并根据国家或湖南省有关部门规定送交学位论文，允许学位论文被查阅和借阅；学校可以公布学位论文的全部或部分内容，可以采用复印、缩印或其它手段保存学位论文。同时授权中国科学技术信息研究所将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》，并通过网络向社会公众提供信息服务。作者签名：新签乏世吼塑年』月生日Galeetin．1在高糖诱导

3、人足细胞损伤中的作用摘要：目的通过观察高浓度葡萄糖对人足细胞Galectin．1及足细胞表面标志物podocin表达的影响，初步探讨Galectin．1与足细胞损伤的关系；转染Galectin．1siRNA抑制人足细胞Galectin．1的表达，检测podocin的表达，观察Galectin．1siRNA能否抑制高糖诱导的足细胞损伤。方法以人足细胞株为研究对象，随机分为5组：正常对照组、25mM高糖刺激12小时组、25mM高糖刺激24小时组、25mM高糖刺激48小时组、25mM甘露醇刺激48小时组。采用实时定量PCR(Real．timePCR)、蛋白印迹(Westem．blo

4、t)及免疫荧光的方法测定Galectin．1、podocin的表达。用TransIT-TKO．TransfectionReagent转染Galectin．1siRNA至人足细胞，把足细胞分为3组：正常对照组(未转染Galectin．1s枞)，高糖组(未转染Galectin．1siRNA+25mM高糖刺激)和转染组(转染Galectin．1siRNA+25mM高糖刺激)。采用实时定量PCR(Real．timePCR)和蛋白印迹(Westem．blot)方法测定Galectin．1和podocin水平的表达。估量拿日木(1)正常培养条件下，人足细胞表达podocin，仅表达少量G

5、alectin．1。(2)25mM高糖刺激人足细胞不同时间后，Galectin．1mRNA表达逐渐上调，呈时间依赖性，12h、24h和48hGalectin．1mRNA表达量分别为对照组的1．3倍、2．2倍(尸

6、，12h、24h和48hpodocinmRNA表达量分别为对照组的60％、44％和33％，均有统计学意义(尸O．05)。(4)免疫荧光结果显示，Galectin．1荧光主要表达于足细胞胞浆，胞核中也有部分表达，podocin的荧光则主要表达与细胞膜上；与对照组相比，25mM高糖分别刺激人足细胞24h、48h后，Galectin．1荧光表达逐渐增强，pod

7、ocin的荧光表达则逐渐降低。(5)Galectin．1siRNA转染入人足细胞后，与高糖刺激组相比较，Galectin-1mRNA及蛋白的表达均被抑制(P<0．05)，同时podocinmRNA及蛋白表达上调，与高糖组相比差异均有统计学差异(P<0．05)。结论(1)Galectin．1在体外培养的人足细胞株上有表达，高糖能上调Galectin．1的表达，且呈时间依赖性。(2)高糖能诱导体外培养的人足细胞表面标志物podocin表达下调。(3)Galectin．1可能与高糖诱导人足细胞损伤相关。(4)