肾损伤分子1对高糖诱导人肾小管上皮细胞自噬作用的影响

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1、学校代码10459学号或申请号201212443197密级公开if州k%硕士学位论文紧损伤分子1对高糖诱导人肾小管上皮细胞自嗟作用的影响作者姓名：陈军童导师姓名：唐琳教授学科门类：医学专业学位名称：内科学（肾脏病学）培养院系：郑州大学第一附属医院完成时间：2015年3月AthesissubmittedtoZhengzhouUniversityforthedegreeofMasterEffectsofKIM-1onautophagyinducedbyhighglucoseinhumantubularepithelialcellsPostgradua

2、te�JuntongChenSupervisor�Prof.LinTangDepartmentofNephrology,TheFirstAffiliatedHospitalofZhengzhouUniversityMarch2015原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究所取得的成果。除文中己经注明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体己经发表或撰写过的科研成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本声明的法律责任由本人承担。学位论文作者：日期力p年t月>

3、日学位论文使用授权声

4、明本人在导师指导下完成的论文及相关的职务作品，知识产权归属郑州大学。根据郑州大学有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留或向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版,允许论文被查阅和借阅；本人授权郑州大学可以将本学位论文的全部或部分编入有关数据库进行检索，可以釆用影印、缩印或者其他复制手段保存论文和汇编本学位论文。本人离校后发表、使用学位论文或与该学位论文直接相关的学术论文或成果时，第一署名单位仍然为郑州大学。保密论文在解密后应遵守此规定。学位论文作者日期0/r年V月日肾损伤分子1对高糖诱导人肾小管上皮细胞自噬作用的影响摘要背景及目的糖尿病肾

5、病(diabeticnephropathy,DN)是糖尿病最严重的并发症之一，其主要以进行性肾间质纤维化(renalinterstitialfibrosis,RIF)形成为特征，是导致终末期肾脏疾病(end-stagerenaldisease,ESRD)的主要原因。因此，探讨糖尿病肾病的进展机制，寻求防治糖尿病肾病的新靶点具有重要意义。自噬是细胞维持蛋白代谢平衡及内环境稳定的一种方式，可被包括活性氧(Reactiveoxygenspecies,ROS)、内质网应激、缺氧等多种形式的细胞应激反应所激活，而上述应激反应在糖尿病肾病的发生发展机制当中同

6、样起重要作用。同时，近期的研究提示，细胞自噬水平的增加与RIF的进展明显相关。肾损伤分子1(Kidneyinjurymolecular1,KIM-1)是由受损近端肾小管上皮细胞表达的一种跨膜糖蛋白。许多研究表明KIM-1是一种在判断肾脏损伤和疾病预后中敏感而又特异的指标。然而近期的研究发现KIM-1不仅可作为一种肾脏损伤的非侵袭性指标，更在肾脏的损伤和修复中起到了重要作用。在急性肾脏损伤(acutekidneyinjury,AKI)当中，KIM-1可促使肾小管上皮细胞向“半专业”吞噬细胞转化，增强细胞的自噬功能；在包括糖尿病肾病在内的多种慢性肾脏

7、病(chronickidneydiseases,CKD)当中，KIM-1与RIF的程度呈正相关。而在糖尿病肾病当中，KIM-1是否可对细胞自噬作用进行调控，从而参与糖尿病肾病的进展并不清楚。本实验以人近端肾小管上皮细胞为研究对象，以体外高糖培养环境为刺激因素，观察KIM-1对不同高糖处理时间条件下肾小管上皮细胞自噬相关蛋白—微管相关蛋白l轻链3II型(microtubule-associatedprotein1lightchain3II,LC3II)（自噬存在的标志分子，其含量的多少与自噬泡数量呈正比）和细胞自噬体（经透射电子显微镜观察，为诊断细

8、胞自噬的金标准）的影响，明确KIM-l与细胞自噬的关系，探讨KIM-1参与糖尿病肾病进展的可能机制，从而为DN的防治提供新的思路和靶点。I方法：体外培养HK2并进行如下分组:(1)正常对照组(D-葡萄糖5.6mmol/L)；(2)高渗组(D-葡萄糖5.6mmol/L+D-甘露醇24.4mmol/L)；(3)高糖组(D-葡萄糖30mmol/L)；(4)高糖+KIM-1siRNA组；(5)高糖+siRNA对照组。分别于不同培养时间条件下进行测定。Western印迹法检测细胞KIM-1、自噬标志蛋白微管相关蛋白l轻链3II型（LC3II）蛋白的表达；实

9、时定量PCR法(real-timePCR)检测细胞KIM-1、LC3IImRNA的表达。透射电子显微镜下观察细胞内自噬体的形成。结果：正