高糖诱导人肾小管上皮细胞凋亡的机制研究

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1、第30卷第3期青海医学院学报V01．3ONo．32009生JOURNALOFQ~GHAIMEDICALCOLLEGE20o9___】同Cj糖诱导人肾小管上皮细胞凋亡的机制研究马玉香白光辉白雪源李作祥冯哲傅博(1．青海大学医学院；2．解放军总医院肾病科暨全军肾病研究所)摘要目的探讨高血糖对人肾小管上皮细胞活性氧(ROS)产生及凋亡的影响。方法将人近端肾小管上皮细胞(HKC)分别以不同时间在含有5．5mMD(右旋)一葡萄糖(正常糖对照组)、25mMD一葡萄糖(高糖组)和20mML(左旋)一葡萄糖+5．5mMD

2、一葡萄糖(渗透压对照组)的DMEM培养基中培养。’用化学发光法特异性检测细胞内HO水平。将细胞用荧光染料CM—H，DCFDA标记后用激光共聚焦显微镜检测活细胞中总ROS水平。用荧光染料Hoechst33258对细胞染色后在荧光显微镜下计数细胞凋亡率。用AnnexinV—FITC／碘化丙锭双染后用流式细胞仪检测各组细胞的凋亡率。在高糖组中同时加入30mM的抗氧化剂牛磺酸，观察其对细胞凋亡的影响。结果化学发光法检测和共聚焦显微镜检测显示高糖可明显促进肾小管上皮细胞内活性氧的产生，与其他两对照组比较有显著差异(

3、P<0．O1)；Hoechst33258染色法检测和流式细胞仪检测分析显示高糖可明显诱导肾小管上皮细胞的凋亡发生，与其他两对照组比较有显著差异(P<0．O1)；流式细胞仪检测分析显示抗氧化剂牛磺酸可明显抑制高糖诱导的肾小管细胞凋亡，与高糖组比较有显著差异(P<0．O1)。结论高糖可通过促进细胞内生成过量ROS而诱导肾小管细胞凋亡发生，抗氧化剂可阻断高糖诱导的肾小管细胞凋亡。关键词高糖肾小管活性氧凋亡牛磺酸中图分类号Q493．8Q735文献标识码ATHEMECHANISMoFAPoPT0SISINDUCED

4、BYHIGHGLUCoSEINHUMANRENALTUBULAREPITHELIALCELLSMaYuxiang，BaiGuanghui，BaiXueyuan。，LiZuoxiang，FengZhe，FuBo(1．QinghaiUniversityMedicalCollege；2．ChinesePLAInstituteofNephrology，ChinesePLAGeneralHospita1)AbstractObjectiveToinvestigatetheeffectofhighglucoseonRO

5、SproductionandapoptosisintherenaltubularepithelialcellsandtOelucidatethemolecularmechanismofrenaltubuleapoptosisinducedbyhighglucose．MethodsHumanproximalrenaltubularcelllineHKCwasculturedinDMEMmediumcontaining5．5mMD(Dex-trorotation)一glucose(normalglucosec

6、ontro1)，25mMD—glucose(highglucose)and5．5mMD—glucose+20mML(Laevorotation)一glucose(osmoticpressurecontro1)fordifferenttime．ChemoluminescenceassaywasusedtodetectH。O，levelintracellularly．ROS(reactiveoxygenspecies)contentinHKCwasdeterminedwithlaserconfocaImicr

7、oscopeafterthecellsbeinglabeledwithfluorescentdyeCM—HDCFDA．AfterHoechst33258stai-ning，apoptosisrateoftheHKCcellswascountedunderfluorescentmicroscope．Flowcytometrywasusedtodeter-基金项目：国家自然科学基金(No．30870920)马玉香(1968～)，女，汉族，山西籍，主治医师，青海大学医学院2006级研究生150mineapopt

8、osisrateofHKCcellsafterdualstainingwithAnnexinV—FITC／propidiumiodide．Meanwhile，30mMantioxidanttaurinewasaddedintomediumcontaining25mMD—glucoseanditseffectonapoptosisofrenaltubularcellswasobserved．ResultsChemolumines