trb3基因参与高糖诱导的胰岛β细胞凋亡机制的研究

《trb3基因参与高糖诱导的胰岛β细胞凋亡机制的研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、中国医学科学院t中国协和医科大学博士学位毕业论文TRB3基因参与高糖诱导的胰岛p细胞凋亡机制的研究中文摘要9细胞功能衰竭是2型糖尿病晚期一个重要的特征，高糖诱导的细胞凋亡是导致胰岛p细胞功能衰竭的主要原因之一。研究高糖诱导的胰岛p细胞凋亡的分子机制对阐明2型糖尿病的发生和发展，以及对糖尿病的防治都具有重要的意义。1HbU懿同源蛋白3(tribbl船h啪olog3，耵沿3)是新发现的一种具有广泛生物学功能的基因。TRB3可以和A聊KB(prOteinl【ins鹋eB)结合抑制胰岛素信号通路，参与胰岛素抵抗的发生；通过

2、ATF4／CHoP(activatingt豫nscriptionfactor4／CCAAT／enh锄c盯bindingproteinshomolog岫protein)通路参与细胞应激反应的调控。目前TRB3基因是否参与高糖诱导的胰岛p细胞凋亡的研究尚未见文献报道。目的：研究高糖条件下TRB3基因的表达情况，以及TRB3基因过表达对高糖诱导的胰岛p细胞凋亡的影响和可能涉及的分子机制。方法：应用实时定量PCR(豫ll-timequantitativcpolym唧sechainfeaction，他al·timePCR)检

3、测糖尿病GK大鼠(Goto．Kakizal(i、Ⅳist村斑t，GKrat)胰岛细胞和高糖刺激的INS．1细胞中TRB3基因mIⅢA的表达。应用Tct．on系统将TRB3质粒转染到INS一邶(r9)细胞内，构建可诱导TRB3基因表达的p细胞系。采用fcal．timePCR和细胞免疫荧光方法证实所构建的p细胞TRB3基因的可诱导性。应用免疫蛋白印记(WestemBlot)分析强力土霉素(doxycycline，DOX)诱导9细胞TRB3基因表达的量-效和时一效关系。应用酶联免疫吸附分析(enzyIIleIinkcdi

4、mmuneosorb％tassa弘ElLSA)和MTT法分别检测TRB3基因过表达对p细胞胰岛素分泌和细胞增殖的影响。应用DNA片段化、TUNEL、Annexinv／PI流式细胞仪分析高糖条件下TRB3过表达对§细胞凋亡的影响，以及RNA干扰TRB3基因表达对p细胞凋亡的调节作用。应用激光共聚焦显微镜观察TRB34中国医学科学院-中国协和医科大学博士学位毕业论文基因过表达的p细胞线粒体形态和细胞色素C分布。应用W醅t锄Blot和ELlSA分别检测细胞色素C含量和c印asc．3活性。应用流式细胞术检测Tlm3基因过表

5、达对p细胞线粒体膜电位(m翎曲r觚epot锄tial，△Ym)和反应性活性氧(他a撕vcoxyg％spccies，l的S)产生的影响。结果：糖尿病GK大鼠胰岛细胞中TRB3mRNA的表达较正常对照组明显升高，高糖可以明显上调INS．1细胞中TRB3基因mRNA的表达。采用Tet-0n系统，我们建立了TRB3基因可诱导的p细胞系。DoX可以诱导TRB3基因在此细胞系中的表达，并表现明显的量．效和时．效关系。在高糖条件下，T髓3基因过表达可以抑制B细胞的增殖并减少胰岛素的分泌。采用DNA片段法，TUNEL染色和流式细胞

6、分析都证实，TRB3基因过表达明显促进高糖引起的p细胞凋亡。采用sil讯A干扰技术抑制TRB3基因在p细胞内的表达，则可明显降低高糖诱导的p细胞凋亡。激光共聚焦显微镜观察发现，TRB3基因过表达的p细胞的线粒体形态发生变化，细胞色素C的分布出现异常。W碗锄Blot显示细胞色素C释放增加。ELISA检测发现，TRB3过表达的B细胞中Caspase．3的活性升高。流式细胞仪分析显示，TRB3过表达促进B细胞线粒体△甲m下降和ROS含量增加。以上结果提示，这些因素可能与TRB3基因参与高糖诱导胰岛p细胞凋亡的机制相关。结

7、论：T髓3基因参与高糖诱导的胰岛p细胞凋亡。关键词：TRB3，6细胞，细胞凋亡，活性氧S中国医学科学院-中国协和医科大学博士学位毕业论文TibblesHomolog3ParticipatinginHighGlucoseInducedBetaCeUApoptosisAbstractThcbetacelldys如nctionis孤importantch盯act盯ofthclatestageoftype2diabetcs．Highglucoscinducingbetaccllapoptosisisacrucialcycl

8、eintheprocessofbeta∞Udys触ction．Itisimportantforund盯st锄dingthcpat】吣genesisoftyl圮2diabetestoinVestigatethemolccul缸mec_h姐ismofllighglucoseinducedbetacellapoptoSis．Tibbl伪homolog3(TRB3)