TRB3在高糖诱导的胰岛细胞凋亡中的作用及机制-论文.pdf

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1、·论善·JMedRes，Jul2014，Vo1．43No．7TRB3在高糖诱导的胰岛细胞凋亡中的作用及机制钱波余瑞汤铜刘志宁于刚田多郑璐摘要目的研究高表达TRB3基因对高糖诱导的B细胞凋亡的影响及其参与的凋亡机制。方法构建强力土霉素(DOX)可诱导表达TRB3的B细胞系，RT—PCR检测TRB3、ATF4、Bip、Chop等基因mRNA的表达，DNA片段化检测高糖诱导的细胞凋亡，Westernblot检测KDEL蛋白的表达，和油红O检测细胞内脂质的累积情况。结果DOX可以诱导TRB3基因mRNA

2、和蛋白表达升高，高表达TRB3可以明显增加高糖诱导的B细胞凋亡，高表达TRB3可以促进内质网应激相关的基因mRNA以及KDEL蛋白的表达上调，TRB3可以抑制B细胞胰岛素分泌和减少细胞内脂质的累积。结论TRB3基因通过内质网通路参与并促进高糖诱导的B细胞凋亡，影响胰岛素分泌和脂质代谢功能。关键词TRB3胰岛细胞内质网应激凋亡[中图分类号]R587[文献标识码]AEffectandMechanismofTRB3inIsletCellsApoptosisInducedbyHighGlucose．Qi

3、anBo，YuRui，TangTong，eta1．TheSecondHospi一￡nfofAnhuiMedicalUniversity，Anhui230601，ChinaAbstractObjectiveToexploretheeffectandmechanismofTRB3overexpressingonBcellsapoptosisinducedbyhighglucose．MethodsBcelllineexpressingTRB3geneinducedbyDOXwasconstructed

4、．ThemRNAexpressionofTRB3，ATF4，Bip，ChopweredetectedbyRT—PCR．ThecellapoptosiswasobservedbyDNAladderformationinhighglucosemedium．TheexpressionofKDELwasexaminedbyWesternblot．ThelipidaccumulationwasshowedbyOilRedOincells．ResultsDOXcouldinducethehighexpres

5、sionofTRB3mRNAandprotein．HighexpressionofTRB3increasedtheapoptosisofBcellsinducedbyhighglucose．TheexpressionofgenesmRNAandKDELproteinwasup—regulatedbyTRB3inthepathwayforendoplasmicreticulumstress．TRB3couldinhibittheinsulinse—cretionanddecreasethelipi

6、daccumulation．ConclusionTRB3couldinvolveinpcellsapoptosisbyhighglucoseintheendoplasmicre-ticulumstresspathwayandinterferewiththeinsulinsecretionandthelipidmetabolism．KeywordsTRB3；Isletcell；Endoplasmiereticulumstress；ApoptosisTribbles同源蛋白3(tribbleshom

7、olog3，TRB3)DOX)依赖的反式转录激活因子控件，可被DOX诱导，导入含是果蝇体内发现的哺乳动物同源基因，是人类伪激酶有TRB3基因序列的质粒，经克隆筛选得到DOX可诱导的TRB3细胞系[3J。DOX最大诱导剂量为500ng／ml，诱导TRB3Tribbles家族成员之一。研究发现TRB3作为一种应基因表达时间为48h。本实验中高糖刺激使用的糖浓度为激反应相关因子，在钙代谢异常、生长因子缺失、谷胱30mmol／L，72h。甘肽缺乏、乙醇和缺氧等刺激条件都会导致其基因表2．反转录PCR：T

8、RB3细胞系培养24h，加入DOX继续培达上调引。糖尿病患者长期高糖微环境导致胰岛养48h或无DOX，培养液培养72h。依RNA提取试剂盒(Qia—细胞应激并发生凋亡，是导致糖尿病病情加重的重要gen公司)说明书，进行RNA提取。取RNA样品2g，按RNA因素。本研究探讨TRB3在高糖诱导的胰岛细胞凋反转试剂盒(Qiagen公司)说明书，配制反应混合液，PCR仪上亡过程中作用及可能机制。37℃反应60min。RT—PCR反应，取0．5lcDNA作为模板，材料与方法基因引物序列、退火温度和产物长度