sirt1foxo1在高糖诱导小鼠系膜细胞凋亡中的作用

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1、授予单位代码１００８９巧＾＾钟大這ＨｅｂｅｉＭｅｄｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ硕±学位论文在职科学学位Ｓｉｒｔｌ／ＦｏｘＯｌ在高糖诱导小鼠系膜细胞调亡中的作用学位申请人：张瑞导师：史永红教授专业：病理学与病理生理学二级学院：基础医学院２０１５年１０月河北医科大学学位论文使用授权及知识产权归属承诺本学位论文在导师（或指导小姐）的指导下，由本人独立完成。本学位论文研究所获得的研究成果，其知识产权归河北医科大学所有。河北医科大学有权对本学位论文进行交流、公开和使用。凡发表

2、一署名为单位河北医科大学与学位论义主要内容相关的论文，第，试验材料、原始数据、申报的专利等知识产权均巧河北医科大学所有。否则，承担相应法律责任。研究生签名导师签章三级学院领导盖章＇＇＇＞（７／ｊｒ年／／月之Ｈ河北医科大学研究生学位论文独创性声明本论文是在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果，除了文中特别加＾１＾１标注和致谢等内容外，文中不包含其他人已经发表或撰写的研究成果。，指导教师对此进行了审定本论文由本人独立撰写，文责自负。研究生签名：导师签章：又口？ＪＴ年／／月Ｊ＾日Ｉ

3、目录中文摘要………………………………………………………………………1英文摘要………………………………………………………………………4研究论文SIRT1/FOXO1在高糖诱导小鼠系膜细胞凋亡中的作用前言………………………………………………………………………7材料与方法………………………………………………………………8结果……………………………………………………………………14附图……………………………………………………………………16讨论……………………………………………………………………23结论……………………………………………………………

4、………24参考文献………………………………………………………………25综述Sirtuin与肾脏疾病………………………………………………28致谢…………………………………………………………………………38个人简历……………………………………………………………………39中文摘要SIRT1/FOXO1在高糖诱导小鼠系膜细胞凋亡中的作用摘要目的：糖尿病肾病(diabeticnephropathyDN)是糖尿病最常见的微血管并发症。以糖尿病肾病为原发病的终末期肾衰发病率逐年上升。在我国，每年花费大量的人力、物力、财力维持这些病人的治疗。然而糖尿病肾病

5、的发病机制仍不清楚，临床上治疗糖尿病肾病有待于新的突破。目前，虽然对于DN的发病机制仍不清楚，但是大量研究证实氧化应激在DN的发病机制中发挥了非常重要的作用。糖尿病的机体处于氧化应激状态，促进了脏器实质细胞的损害和凋亡的发生。ROS的产生与高糖诱导肾小球系膜细胞(mesangialcell，MC)凋亡密切相关。而FOXO1(ForkheadBox,FOX)是PI3K/AKT信号通路中关键的转录调节因子。在氧化应激环境中，PI3K/AKT信号通路会促使FOXO1发生去磷酸化作用并增加其结合下游因子DNA的能力，从而定位于细胞核，增强其转录活性

6、。FOXO1与氧化应激及氧化应激引起的细胞凋亡等密切相关。然而，到目前为止，有关FOXO1与系膜细胞凋亡的具体关系以及相关作用机制还未见报道。在本项目中我们拟通过体外培养细胞，采用FOXO1小干扰RNA上调FOXO1表达，观察SIRT1/FOXO1与肾脏系膜细胞凋亡的关系。为了研究在慢性肾脏疾病中肾脏实质细胞凋亡的分子机制。我们进一步检测了凋亡相关蛋白和部分凋亡相关信号通路。为慢性肾脏疾病的治疗提供新思路。方法：构建FOXO1的siRNA干扰质粒，使用Lipofectamine2000转染试剂将FOXO1siRNA质粒和对照质粒分别转染MM

7、Cs，G418筛选稳定的MMCs细胞系。以正常糖浓度（NG）培养的MMCs为对照，以HG刺激MMCs。TUNEL法检测凋亡细胞数目，Westernblot法检测细胞内SIRT1、FOXO1、Bax、Bcl-2、Cleavedcaspase-3、SOD1、SOD2、P47,NOX4、β-actin蛋白的表达。RT-PCR检测细胞FOXO1、Bax、Bcl-2的mRNA的表达。结果：1高糖对FOXO1表达的影响实验结果显示，与NG组相比，HG组FOXO1的表达明显减少。FOXO11中文摘要siRNA质粒转染能明显上调高糖诱导的FOXO1表达情况

8、。证实FOXO1siRNA对MMC的FOXO1上调效果明显。2敲低FOXO1表达明显抑制高糖诱导的MMC凋亡。TUNEL结果显示，与NG组相比，HG组MMC凋亡明显增多，与HG组