gsk-3β在高糖环境下足细胞转分化效应中的作用

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1、AthesissubmittedtoZhengzhouUniversityforthedegreeofMasterImpactofGSK-313onepithelial—mesenchymaltransitionofMicePodocyteinhighglucoseconditionByLilyYangSupervisor：ZhangsuoLiuDepartmentofNephrologyTheFirstAffiliatedHospitalofZhengzhouUniversityApril2013原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导

2、师的指导下，独立进行研究所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的科研成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均己在文中以明确方式标明。本声明的法律责任由本人承担。学位论文作者：杨幕1苇＼日勘侈年多月肪学位论文使用授权声明本人在导师指导下完成的论文及相关的职务作品，知识产权归属郑州大学。根据郑州大学有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留或向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅；本人授权郑州大学可以将本学位论文的全部或部分编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或者其

3、他复制手段保存论文和汇编本学位论文。本人离校后发表、使用学位论文或与该学位论文直接相关的学术论文或成果时，第一署名单位仍然为郑州大学。保密论文在解密后应遵守此规定。学雠文懈懒瓠吼矽绛多月臃摘要背景GSK-3p在高糖环境下足细胞转分化效应中的作用硕士研究生：杨莉莉导师：刘章锁教授郑州大学第一附属医院内科学(‘肾病)河南郑州450052要糖尿病肾病(diabeticnephropathy，DN)是糖尿病患者最常见的微血管并发症之一，也是导致终末期肾脏病(end．stagerenaldisease，ESRD)的重要原因。蛋白尿是DN最常见的临床表现，也是糖

4、尿病。肾病进展的独立危险因素，因此减少蛋白尿是糖尿病肾病治疗的重要举措。足细胞是肾小球滤过屏障的重要组成部分，其结构和功能的改变在DN蛋白尿的发生、发展过程中起到了关键的作用。足细胞参与蛋白尿形成的原因很多，机制复杂。作为一种终末分化的脏层上皮细胞，足细胞在某些刺激物的作用下可通过特定程序向问充质细胞转化(epithelial．mesenchymaltransition，EMT)，但足细胞在高糖环境下是否发生上皮一间充质转分化以及足细胞的问充质转分化是否参与蛋白尿的形成尚不清楚。目前研究认为，有三条信号通路介导了足细胞的转分化过程，即TGF—p／sm

5、ad、integrin／ILK和Wnt／13一catenin，而广泛存在于真核生物体内的糖原合成酶激酶3p(glycogensynthasekinase3D，GSK-313)是以上三条通路的参与者，但其是否参与高糖环境下足细胞的转分化目前尚不明确。无机离子锂(本课题使用氯化锂)是一种治疗狂躁和抑郁症的药物，是GSK．3p的选择性活性抑制剂，通过锂的作用，抑制高糖环境下GSK．3p的活性，并观察足细胞表型和功能的变化，或许能为糖尿病肾病蛋白尿寻找新的治疗靶点。摘要目的本实验通过观察高糖环境下小鼠足细胞表型和功能的改变、GSK一313表达量和活性的改变、

6、以及抑制GSK一3B活性和表达量后足细胞表型和功能的变化，来研究GSK一3B在高糖环境下足细胞转分化效应中的作用，并为糖尿病肾病蛋白尿的治疗寻找新的靶点。方法以条件永生化小鼠足细胞为研究对象。1．高糖环境下检测足细胞表型和功能：(1)不同浓度葡萄糖对足细胞表型的影响：用含不同浓度葡萄糖(12．5、25、50mmol／L)的1640培养基处理足细胞36h，并设正常对照组(5．6mmol／L葡萄糖)和高渗对照组(5．6mmol／L葡萄糖+44．4mmol／L甘露醇)，采用Western．blot与间接免疫荧光的方法检测足细胞表面标记蛋白nephrin，p

7、odocin和间充质细胞表型标志物a．SMA，Fibronectin的表达；(2)不同浓度葡萄糖刺激足细胞36h后白蛋白流入量的变化：将分化成熟的足细胞以一定密度(5x103)接种于transwell小室上层的聚酯纤维膜上，待细胞融合后，换无血清培养基饥饿8小时，然后使用含不同浓度葡萄糖(5．6、12．5、25、50mmol／L)的1640培养基处理足细胞36小时，36h后使用灭菌PBS洗涤细胞两次，然后给Transwell滤过膜的上部换上0．3ml的RPMll640培养基，下部充满lml含40mg／ml胎牛血清白蛋白的RPMll640培养基，于37

8、℃孵育1小时后，取上层培养液，用BCA蛋白浓度测定试剂盒测定滤过膜上部培养基的白蛋白浓度，即白蛋白流入量。2