microrna-200c在高糖诱导腹膜间皮细胞转分化中的作用及分子机制

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1、万方数据中图分类号UDC博士学位论文学校代码密级10533microRNA．200c在高糖诱导腹膜间皮细胞转分化中的作用及分子机制EffectofmicroRNA-200conhighglucosemduced印ithelial-mesenchymal仃ansitioni11p嘶tonealmesomelialcells作者姓名：张林学科专业：临床医学研究方向：内科学学院(系、所)：湘雅二医院指导老师：刘伏友教授论文答辩日期zⅡⅡL彳答辩委员会主中南大学二。一三年十月万方数据学位论文原创性声明本人郑重声明，所呈交的

2、学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了论文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得中南大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我共同工作的同志对本研究所作的贡献均已在论文中作了明确的说明。申请学位论文与资料若有不实之处，本人承担一切相关责任。作者签名：名纽嗍逊年丝月孚日学位论文版权使用授权书一名：纽翩签剑日期：2兰止年卫月当日日期：型年卫月二始TI万方数据本课题受以下基金资助：国家自然科学基金面上项目(30871169)卫生

3、部部属(管)医院临床学科重点项目(2010_2012)万方数据microRNA．200c在高糖诱导腹膜间皮细胞转分化中的作用及分子机制摘要研究背景腹膜透析(peritonealdialysis，PD)由于具有操作简单、血流动力学稳定和有利于保护残肾功能等优点，因此被广泛运用于终末期肾脏疾病(endstagerenaldisease，ESRD)患者的治疗，然而PD的相关并发症影响着ESRD患者的治疗效果和预后，其中透析相关性腹膜纤维化(peritoneal舶msis，PF)导致的超滤衰竭(ultmfiltration

4、failure，UFF)是挣续性非卧床腹膜透析(continuous锄bulatouperitonealdialysis，CAPD)患者不能持续治疗的主要原因。转化生长因子p(transfoHninggroⅢhf-aCto卜p，TGF．p)和高糖介导的PF发病机制一直是国内外PD领域研究的热点，有研究发现，上皮细胞．问充质细胞转分化(epithelial一mesenchymaltraIlsition，EMT)在腹膜纤维化发生的过程中起着关键的作用，它被认为是腹膜纤维化的起始环节和可逆阶段。微小RNA(microRN

5、A，miRNA，miR)是广泛存在于真核生物细胞中长度为21．24个核苷酸的非编码小分子砒妊，其通过“种子”序列与靶基因列刚A3’端非翻译区(untranslatedre百on，UTR)特异性结合，导致蛋白翻译受到抑制或靶mRNA降解，从而影响调节转录后的基因表达，在多种生理过程中发挥重要作用。miRNA一200家族是近年来研究的热点，尤其miI矾A．200家族与EMT密切相关，miRNA一200通过调控EMT过程，对胚胎的发育、肿瘤的侵袭转移及器官纤维化均起着重要作用。尽管miRNA一200c在腹膜间皮细胞上是否

6、有表达以及其在腹膜间皮细胞EMT和腹膜纤维化中的作用国内外尚未见报道。但基于以上分析，我们认为，microRNA．200c可能参与了调控腹膜间皮细胞EMT及腹膜纤维化的过程，并且调节miRNA．200c的表达水平可能影响腹膜间皮细胞的EMT过程。万方数据第一章腹膜透析患者腹膜透析流出液细胞中microRNA．200c的表达及与转分化的关系目的：检测腹膜透析患者腹膜透析流出液细胞中microRNA．200c的表达及EMT发生情况，初步探讨microm叮A．200c与腹膜间皮细胞EMT的关系。方法：随机选取新开管cAP

7、D患者13人，PD时间≥1年者14人，分离培养并鉴定流出液细胞：通过realtimePCR检测流出液细胞中microRNA一200c的表达；利用realtimePCR及westemblot分别检测流出液细胞中E一钙黏素(E—cadherin)、波形蛋白(vimentin)、纤维连接蛋白(舢ronectin，FN)、胶原蛋白I(C011agen．I，Col—I)的砌I斟A及蛋白表达。并对microRNA．200c与E—cadllerin、vimentin、FN、C01—1进行相关性分析。结果：腹透流出液细胞为人腹膜间

8、皮细胞(humanperitonealmesothelialcells，}玎?MC)，不同透龄患者流出液细胞存在形态学改变。microRNA一200c在PD≥1年组中的表达较新开管组明显下降。PD21年组流出液细胞E．cadherinmRNA及蛋白表达明显低于新开管组，而vimemin、Col一1及FNlTl】心A及蛋白表达明显高于新开管组。且micro耐寸