wnt%2fβ-catenin信号通路在腹膜透析腹膜间皮细胞转分化中作用及机制的研究

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1、原创性声明本人声明，所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了论文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得中南大学或其他单位的学位或证书而使用过的材料。与我共同工作的同志对本研究所作的贡献均已在论文中作了明确的说明。作者签名：日期：互生三年—』月-L日学位论文版权使用授权书本人了解中南大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留学位论文并根据国家或湖南省有关部门规定送交学位论文，允许学位论文被查阅和借阅；学校可以公布学位论文的全部或部分内容，可以采用复印、缩印或其它手段保存学位论文。同时授

2、权中国科学技术信息研究所将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》，并通过网络向社会公众提供信息服务。期：独年—厶』目博士学位论文中文摘要Wnt／p-catenin信号通路在腹膜透析腹膜间皮细胞转分化中的作用及机制研究摘要研究背景腹膜透析(peritonealdialysis，PD)是治疗终末期肾脏疾病(endstagerenaldisease，ESRD)的重要替代治疗方法之一。但是，长期暴露于高糖腹膜透析液最终可导致腹膜组织纤维化(peritoneal曲rosis，PF)，透析效能降低，最终导致超滤衰竭(ultrafiltrationfai如re，UFF)，严重影响患者的生活质

3、量和长期存活率。近期研究发现，上皮细胞一间充质细胞转分化(epitllelialmesenchymaltransition，EMT)是腹膜纤维化过程中的触发和始动因素，它可导致腹膜间皮细胞失去间皮细胞的特点，向成纤维细胞转化，产生大量细胞外基质(，extracellularmatrix，ECM)，是腹膜功能退化的关键过程。目前认为，在众多调节间皮细胞EMT的细胞因子和介质中，转化生长因子(transfonninggro叭hfactorD，TGF．p)是最关键的因素。但是，目前腹膜纤维化的机制仍未完全阐明，且尚无有效的治疗方式。Wnt蛋白是一类富含半胱氨酸的分泌型脂化糖蛋白，参与调控

4、了器官发育，细胞分化增殖，细胞极性以及细胞迁移。Wm蛋白通过三条信号通路发挥作用，最经典的为p—catenin介导的Wht／p—catenin信号通路。近年来的研究显示，W州p．catenin信号通路的异常活化与许多疾病，如肿瘤、遗传性疾病和器官纤维化等相关，并已证明其参与EMT的发生。此外，研究证实W州p．catenin与TGF．p信号交互作用，参与介导了TGF．B诱导多种细胞EMT及纤维性疾病的发生过程。基于以上分析，我们认为，W州p．catenin信号通路参与调控腹膜透析腹膜间皮细胞EMT及腹膜纤维化的过程。为此，本研究开展如下。博士学位论文中文摘要第一章腹透流出液间皮细胞W

5、nt／B．catenin通路活性与EMT的关系研究目的检测腹膜透析患者腹膜透析流出液细胞中Wn邯．catenin信号通路的表达及EMT发生情况，初步探讨W州p．catenin信号通路与腹膜间皮细胞EMT及腹膜纤维化的关系方法随机选取新开管持续不卧床腹膜透析患者12人，腹透一年以上者12人，分离培养并经流式细胞术鉴定透析流出液细胞。通过Realtime．PCR检测流出液细胞Wnt(1，2，3，3a，4，5a，7b，8a，10a)，p．catenin，DKKl(Dickkopf1)，淋巴样增强结合因子1(Lymphoidenhancer-bindingfactor1，LEF1)，Q．肌

6、动蛋白(smoothmuscleactin-alpha，0【．SMA)，E．钙粘蛋白(E．Cadherin)，胶原蛋白I(CollagenI，C01I)，纤维连接蛋白(Fibronectin，FN)，基质金属蛋白酶．7(MatrixMetalloproteinases．7，MM噼．7)的表达，WrestemBlot检测流出液细胞p．catenin，E—Cadherin，0【．SMA，COL．I的表达。结果(1)腹透流出液细胞经鉴定为腹膜间皮细胞，且细胞形态出现纤维样改变。(2)透析一年以上组仅．SMA，ColI，FN表达明显高于新开管组，E—Cadherin表达明显低于新开管组(3

7、)透析一年以上组Wml，Wnt5a，Wnt7b，Wnt8a砌[ⅢA表达明显高于新开管组，且D．cateninr11】5ⅢA及蛋白表达明显高于新开管组(4)透析一年以上组DKKl，LEFl及M^佃．7训[ⅢA表达高于新开管组。结论随腹膜透析时间延长，W州p．catenin信号通路活性显著升高，腹膜间皮细胞发生EMT改变，提示Wnt／p．catenin信号通路可能与腹膜透析腹膜间皮细胞EMT及腹膜纤维化相关。关键词腹膜透析；腹膜纤维化；人腹膜间皮细胞；上皮细胞．间充质细胞