cape在神经胶质瘤异常wntβcatenin通路中的作用及机制研究

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1、重庆医科大学博士学位论文CAPE在神经胶质瘤异常Wnt/β-catenin通路中的作用及机制研究姓名：郭川申请学位级别：博士专业：外科学（神经外科）指导教师：唐文渊20090501重庆医科大学博士研究生学位论文CAPE在神经胶质瘤异常Wnt／p．catenin通路中的作用及机制研究摘要咖啡酸苯乙酯(caffeicacidphenethylester，CAPE)是一种非细胞毒性抗肿瘤物质，对肿瘤细胞具有选择性的抑制作用，而对正常细胞几乎没有毒性作用。CAPE最早由蜂胶中提炼出来，是蜂胶抗肿瘤作用的主要活性成分，现在可以通过人工合成的方

2、法获得。研究发现其抗肿瘤作用可能在于抑制异常的Wnt／0．catenin信号通路，调节细胞凋亡相关基因转录和表达，诱导细胞凋亡和抑制核因子．r,B(nuclearfactor-rd3，NF．KB)转录活性。Wnt／13．catenin信号传导通路是胚胎发育所必须的信号系统，过高或过低的表达都将改变细胞的生存状态。目前已经证实该系统的减低表达是引起阿尔茨海默病的重要原因，而过度激活则与多种人类肿瘤的发生有密切的联系。Wnt／13．catenin信号途径可概括为：Wnt_Frz_Dsh_p．catenin的降解复合体解散_p—caten

3、in积累，进入细胞核_TCF／LEF_基因转录(如c-myc、cyclinD1、VEGF)。13-catenin与Tcf结合成复合物并发生核转位是此通路被过度激活的使动因素，下游癌基因的激活则是肿瘤发生发展的直接推动者。目前，在神经胶质瘤中已有关于干扰13-catenin表达的报道，但有关CAPE与神经胶质瘤中13-catenin表达的相关性目前还未见报道。我3重庆医科大学博士研究生学位论文们考虑CAPE在神经胶质瘤中是作用于此信号通路的关键环节，也就是13-catenin的过表达与核转位。因为CAPE如果只是抑制了某个下游靶基因，

4、则对上游基因影响很小。因此抑制上游关键基因，才会对抑制肿瘤起到明显的作用。本研究的主要目的足：①研究CAPE对神经胶质瘤的抑制作用②检测CAPE体内、外对神经胶质瘤异常Wnt／13．catenin通路13-catenin、Tcf-4及靶基因c．myc、VEGF的影响，探讨CAPE作用于该通路的靶点。我们以13-catenin为切入点，采用免疫荧光、实时荧光定量RT-PCR、流式细胞、Westemblot等技术，观测CAPE在体内和体外对神经胶质瘤异常wnt／13-catenin通路13-catenin、Tcf-4及靶基因c．myc、

5、VEGF的影响，探讨CAPE作用于该通路的靶点，并构建重组腺病毒13-catenin及siRNA载体，探讨13-catenin在CAPE抑制肿瘤中的作用，从而研究CAPE对神经胶质瘤抑制作用的分子机制，以期为CAPE的研究提供理论基础。本实验的第一部分成功构建Ad．13．catenin与Ad．p—cateninsiRNA腺病毒载体，使我们可以加强或抑制13-catenin在神经胶质瘤U251细胞株及裸鼠移植瘤的表达。通过后面实验对细胞株及移植瘤13-cateninmRNA和蛋白的检测，两种病毒转染率高，表达稳定，可以很好地用于胶质瘤

6、异常Wnt／B．catenin通路的研究。本实验的第二部分通过流式细胞检测、激光共聚焦显微镜、实时荧光定量PCR(Real．TimeQuantitativePCR)、Westernblot等技术，我们4重庆医科大学博士研究生学位论文观察到U251细胞株体外培养时给予CAPE干预后促进了细胞的凋亡，其基础表达、过表达、低表达的13-catenin均被进一步抑制，其下游的Tcf-4及靶基因c．myc、VEGFmRNA及蛋白均相应降低。实验结果提示：CAPE体外是通过抑制了U251细胞的13-catenin基因的表达与核转位，游靶基因的表

7、达也相应下降，因此对神经胶质瘤起到一定的抑制作用。本实验的第三部分通过实时荧光定量PCR、Westernblot等技术，我们观察到U251细胞荷瘤鼠在给予CAPE干预后，其基础表达、过表达、低表达的13-catenin均被进一步抑制，CAPE对移植瘤的抑瘤率达到48。39％(>40％为有效)。实验结果提示：CAPE体内同样是抑制了移植瘤的异常Wnt／13．catenin通路，对胶质瘤的抑制效果明显。综上所述，CAPE是通过抑制了神经胶质瘤U251细胞的异常Wnt／13一catenin通路中的13-catenin基因表达而对神经胶质瘤

8、起到一定的抑制作用。关键词：咖啡酸苯乙酯，13-catenin，神经胶质瘤，裸鼠，成瘤性重庆医科大学博士研究生学位论文EFFECTSoFCAFFEICACIDPHENETHYLESTERINWNT／B．CATENINSIGNALING