wnt%2fβ-catenin信号通路在bmscs向神经样细胞分化中作用

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1、摘要目的：探讨应用EGF、bFGF诱导BMSCs向神经样细胞分化的的可行性，并进一步研究wnt／[3．-eatenin信号通路在BMSCs向神经样细胞分化中的作用。方法：取4周龄大健康清洁级SD大鼠骨髓，采用全骨髓贴壁法体外培养BMSCs，．流式细胞仪检测P3代细胞表面的骨髓基质标志CD,90和造血细胞标志CD4：5。取P3代细胞，根据诱导条件不同分为4组：空白对照组(1％胎牛血清：+DMEMfF一12)、EGF组(20ng／mlEGF+1％胎牛血清+DMEM／F．12)、bFGF组．(20ng／mlbFGF+1％．胎牛血清：+DMElWF一12)、EGF+

2、bFGF组(20ng／mlEGF+20ng／mlbFQF+1％．眙牛血清+DMEM／F．12)，倒置相差显微镜观察细胞形态变化，诱导7天后，采用免疫细胞化学法和Westernblot检测神经细胞标志蛋白NSE、GFAP的表达，RT-PCR检测NSE、GFAP、nestin、[3-catenin、BDNF、GDNF基因mRNA的变化。结果：P3代BMSCs大致呈单一的长梭形或扁平形，紧密漩涡样排列生长，流式细胞仪示CD90表达高达98．95％，而CD,15表达仅1．28％；诱导7天后bFGF和EGF+bFGF组细胞收缩变圆，向四周伸出多个明显突起，部分突起问存

3、在连接，表现出典型的神经元样细胞形态，而EGF组、空白组变化不明显；免疫细胞染色示EGF组GFAP阳性率高于NSE，而bFGF和EGF+bFGF组NSE阳性率高于GFAP；EGF+bFGF组NSE、GFAP阳性率最高，bFGF组次之，与空白对照组、EGF组比较差异均有统计学意义(p

4、F组显著增高，EGF组低于空白组，差异均有统计学意义(p

5、n信号通路；骨髓间充质干细胞；神经样细胞；分化IIAbstractABSTRACTObjeetive：T0investgatethefeasibilityofBMSCsdifferentiateintoneuron-likecellsinducedbyEGF、bFGFinvitro，andfurtherstudytheroleofWnt／13一cateninsignalingpathwayinthedifferentiation，Methods：BMSCswereharvestedfrom4-week-oldSpragueDawleyrats．Flowcyt

6、ometryassaythemarrowstromalsurfacemarkerCDgoandhematopoieticeellmarkerCD45ofBMSCsatpassage3．BMSCsatpassage3weredividedinto4groupsaccordingdifferentculturecondition：controlblankgroup(1％fetalbovineserum+DMEM／F一12)、groupEGF(20ng／mlEOF+1％fetalbovineserum+DMEM／F-12)、groupbFGF(20ng／mlbFG

7、F+1％fetalbovineserum+DMEM／F-12)、groupEGF+bFGF(20ng／miEGF+20ng／mlbFGF+1％fetalbovineserum+DMEM／F-12)，Thenthecellularmorphologywasobservedunderinvertedphasecontrastmicroscope．At7daysafterinduction，ImmunohistochemicalstainingandWesternblotwasusedtodetectneuronspecificenolasefNSE)andcol

8、lagenfibreacidicprotein(GF