Notch信号通路在腹膜透析相关的大鼠腹膜纤维化中的作用研究

《Notch信号通路在腹膜透析相关的大鼠腹膜纤维化中的作用研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、中山人学博}j学位论义Notch信0通路和腹膜透析丰

2、1关的人鼠腹膜纤维化中的作用研究Notch信号通路在腹膜透析相关的大鼠腹膜纤维化中的作用研究博士研究生：朱风新导专师：聂静教授业：内科学中文摘要腹膜透析治疗终木期肾脏疾病已有30余年的历史，现在已经有越来越多终末期肾脏病(endstagerenaldisease，ESRD)患者接受腹膜透析治疗。与血液透析相比，透析的前l一2年内在总体生存率方面腹膜透析是占优势的，但是随着透析时间的延长，大约50％的病人因为超滤衰竭在4—5年内退出腹膜透析。目前的研究表明，随着插管技术的改进，感染率的下

3、降，腹膜纤维化导致的超滤功能丧失已经成为长期腹膜透析患者退出的主要原因。腹膜是一种生理性的半透膜，表面覆盖着一层扁平的腹膜fHJ皮细胞，问皮细胞下有结缔组织、少数成纤维细胞和丰富的毛细血管。以往认为固有的问质成纤维细胞及炎症细胞是造成腹膜纤维化的主要细胞，而间皮细胞仅仅是腹膜损伤的受害者，但是近来的研究发现，长期非生物相容性腹膜透析液的刺激可以导致腹膜间皮细胞发生向问充质细胞的转分化。转分化的间皮细胞具有肌成纤维母细胞的特性，其迁移能力和侵袭性显著增强，并且分泌VEGF,从而在腹膜纤维化及血管增生中发挥作用。因此，腹膜问皮细胞的转分化是腹

4、膜透析患者腹膜功能逐渐降低的关键因素之一。Notch信号通路是一条保守的信号传导途径，广泛表达于从无脊椎动物到脊椎动物等多个物种。Notch信号通路由受体、配体和DNA结合蛋白3部分构成。相邻细胞上的受体和配体结合后导致受体构象改变暴露出蛋白水解酶的酶切位点，并经随后2次蛋白水解作用释放出具有核定位信号的胞内段(Notch中山人学博I：学化论义Notch信吁通路4：腹膜透析相关的人鼠腹膜纤维化中的作用刖f究intracellulardomain，NICD)，从而转移到细胞核内，激活下游革巴基因，参与调控细胞的分化、增殖和凋亡。在上述Not

5、ch信号通路的活化过程中，受体的最后一步蛋白水解作用至关重要，在丫一分泌酶(1，．Secretase)的作用下直接释放出具有活性的NICD。实验证实Y．分泌酶抑制荆(丫一SecretaseInhibitor，GSI)可以通过其特异性的抑制丫．分泌酶的作用，减少NICD的释放，从而抑制Notch通路的活化。目前在哺乳动物中已发现Notch信号通路4种同源受体：Notchl一4，5种同源配体：Delta-l、Delta一3、Delta-4、Jagged一1、Jagged一2和两类下游靶基因：Hes和Hey家族。研究发现Notch信号通路与神经

6、干细胞、肺、胰腺、肾、软骨以及前列腺的分化发育密切相关。近年来的研究更发现异常活化的Notch信号作为致癌冈素或抑癌因素与多个系统的肿瘤发生相关。随着研究的深入，进一步证实Notch信号通路在生物体的生长发育以及肿瘤的发生发展过程中所起的作用与其触发EMT有关。但是，在腹膜组织中是否存在Notch信号通路相关蛋白的表达，Notch信号通路是否也在腹膜问皮细胞转分化的过程发挥作用?尚未见报道。因此本实验的目的是阐明Notch信号通路在腹膜纤维化中的作用和机制，探讨抑制Notch信号活化对腹膜纤维化进程的影响，为腹膜透析相关的腹膜纤维化的治疗

7、提供新的靶点。第一部分观察Notch信号通路在高浓度葡萄糖腹膜透析液所致大鼠腹膜纤维化模型中的变化一、目的构建大鼠腹膜纤维化模型，观察在大鼠腹膜纤维化过程中Notch信号通路的变化。二、方法18只清洁级健康雄性SD大鼠随机分为正常对照组、2周模型组和4周模型组，2周和4周模型组每同腹腔注射4．25％葡萄糖透析液100ml／kg，并分别于连中山大学博士学位论文Notch信号通路在腹膜透析相关的大鼠腹膜纤维化中的作用研究续注射14天和28天后杀检大鼠，行腹膜平衡实验，准确量取腹腔内流出液体，留取0、4小时血清和腹腔流出液标本，计算葡萄糖转运量

8、，并分别留取壁层和脏层腹膜组织。HE和Masson染色观察壁层腹膜病理变化；超滤量和葡萄糖转运量反映腹膜功能；Westernblot检测脏层腹膜组织中0【一SMA、E．cadherin和CollagenI的蛋白表达的变化；同时采用Westernblot检测脏层腹膜组织中TGF一131蛋白的表达；使用RT-PCR检测Notch信号通路的各种受体、配体及下游靶基因的mRNA在脏层腹膜组织中的表达情况，并进一步使用Westernblot和组织问接免疫荧光的方法观察脏层腹膜组织中Notch信号通路配体Jagged—l、Notch信号通路受体Not

9、ch．1以及Notch信号通路的下游靶基因Hes．1的蛋白水平的变化。采用Westernblot检测Notch信号通路的负性调节因子Numb的蛋白水平的变化。三、结果HE染色显示模型组壁层腹膜