erkl／2信号通路在高糖诱导的hk-2上皮间质转分化中的作用

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1、·132·中华临床医师杂志f电子版)2013年9月第7卷第l8期ChinJClinicians(El~ctromcEdition)September15,2013,Vo1．7,No．18基础论著●ERK1／2信号通路在高糖诱导的HK一2上皮间质转分化中的作用赵建荣许珊珊【摘要】目的观察高糖诱导的细胞外信号调节激酶(ERK1／2)信号通路活化在上皮间质转分化中的作用，从而探讨延缓糖尿病肾病肾间质纤维化的发生机制。方法体外培养HK．2细胞，随机分为正常对照组、高糖组、ERK1／2通路抑制剂PD98059+高糖组和高渗组，处理72h后收集细胞，应用免疫细胞化学方法检测a．SMA、CK18的表达

2、；应用Westemblot法检测磷酸化ERK1／2、总ERK1／2表达水平的变化。结果(1)正常对照组胞质有大量CK18蛋白阳性表达，而c【．SMA蛋白表达呈阴性；高糖组胞质中可见大量a-SMA蛋白强阳性染色，而CK18蛋白呈阴性表达；经PD98059处理后，CK18表达较高糖组染色深，而a-SMA表达较高糖组染色浅；高渗组胞质中CK18呈阳性表达，c【．SMA表达呈阴性。(2)正常对照组可见少量总ERK1／2表达，P．ERK1／2蛋白仅有微量表达；经高糖刺激48h后，总ERK1／2表达较正常对照组无明显差异，p-ERK1／2蛋白表达明显增加(户<0．05)；而使用PD98059处理后，

3、总ERK1／2的变化不大，但p-ERK1／2蛋白的表达却显著降低(尸

4、arepithelialcellsZHAOJian-rong,XUShan-shan．RenalDepartmentNephrology,AffiliatedHospitaloflnnerMongoliaMedicalCollege,Hohhot010050,ChinaCorrespondingauthor：ZHA0Jian—rong,Email：jrzhao33@sohu．corn[Abstract]ObieetiveToobservetheroleofERKsignalingpathwayinepithelial-mesenchymaltransitioninducedbyhighg

5、lucose，andtoinvestigatethemechanismoftubuloimerstitialfibrosisassociatedwithdiabeticnephropathy．MethodsThehumanproximaltubularepithelialcellline(HK-2)wererandomlytreatedwimn∞1la1glucose，higlucose，co-incubationofhighglucose、mspecificERKinhibitorPD98059ofD-mannitolfor72h．Theproteinexpressionofa-SMA

6、andCK18inal1thecellswasassessedbythemethodofimmunocytochemistry．TheproteinexpressionofERKandP—ERKwasdeterminedbyWestemblotting．Results(1)incontrolgroup，CK18washighlyexpressedinthecytoplasmoftubularepithelialcells，butnota-SMAwereobserved．Highglucoseenhanceda-SMAexpressedinthecytoplasmoftubularepit

7、helialcells．Meanwhile，theCK18expressedofscarcely．CombiningtllPD98059andhighglucose，theCK18staininghier,butc【-SMAstainingshallowerthanthatoftreating、】lrithhiglucose．InD-mannitolgroup，CK18wasexpressedinthecytoplasmoftubu