rhoarock和mapks信号通路在高糖诱导大鼠肝星状细胞胶原合成中的作用

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1、授予单位代码10089学号或申请号20122062HebeiMedicalUniversity硕士学位论文科学学位RhoA/ROCK和MAPKs信号通路在高糖诱导大鼠肝星状细胞胶原合成中的作用研究生.•张艳导师：周红教授专业：内科学二级学院：第二医院2015年3月河北医科大学学位论文使用授权及知识产权归属承诺本学位论文在导师（或指导小组）的指导下，由本人独立完成。本学位论文研究所获得的研究成果，其知识产权归河北医科大学所有。河北医科大学有权对本学位论文进行交流、公开和使用。凡发表与学位论文主要内容相关的论文，第一署名为单位河北医科大学，试验材料、原始数据、申报的专利等知识

2、产权均归河北医科大学所有。否则，承担相应法律责任。研究生签名：张4&导师签章：二级学院领导盖章…24年B月切日河北医科大学研究生学位论文独创性声明本论文是在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果，除了文中特别加以标注和致谢等内容外，文中不包含其他人已经发表或撰写的研究成果，指导教师对此进行了审定。本论文由本人独立撰写，文责自负。研究生签名：gL导师签章：丨策iv年）月如日目录中文摘要……………………………………………………………………1英文摘要……………………………………………………………………3英文缩写……………………………………………………………………7研究论文Rh

3、oA/ROCK和MAPKs信号通路在高糖诱导大鼠肝星状细胞胶原合成中的作用前言……………………………………………………………………8材料与方法……………………………………………………………9结果……………………………………………………………………17附图……………………………………………………………………19附表……………………………………………………………………23讨论……………………………………………………………………24结论……………………………………………………………………26参考文献………………………………………………………………26综述糖尿病相关的肝纤维化发病

4、机制的研究进展............……………30致谢…………………………………………………………………………41个人简历……………………………………………………………………42中文摘要RhoA/ROCK和MAPKs信号通路在高糖诱导大鼠肝星状细胞胶原合成中的作用摘要目的：随着糖尿病（diabetesmellitus,DM）发病率的逐年上升，DM引起的肝脏病变的严重性也日益受到关注。糖尿病肝脏病变早期主要表现为非酒精性脂肪肝，进一步可发展为非酒精性脂肪性肝炎、肝纤维化和肝硬化；肝星状细胞(Hepaticstellatecells,HSCs)的活化是肝纤维化的中心环节，H

5、SCs激活后，其表型向肌成纤维细胞转化，产生大量细胞外基质，胶原作为细胞外基质的主要成分，其中又以I型、III型为主。目前糖尿病所致肝纤维化的具体机制尚不明确。本研究通过体外高糖培养HSCs，观察RhoA/ROCK和MAPKs信号通路对HSCs胶原合成的影响，探讨糖尿病肝纤维化发生的可能机制，为糖尿肝脏病变的防治提供新的依据。方法：通过体外培养大鼠肝星状细胞株（HSC-T6），台盼蓝染色法进行HSCs活力鉴定。选用2-5代HSCs，无血清1640培养基同步化2小时，将其随机分为6组：正常对照组（NG:含5.5mmol/L葡萄糖）、高糖组（HG:含25mmol/L葡萄糖）、

6、高渗透压组（OSM：5.5mmol/L葡萄糖+19.5mmol/L甘露醇）、HG+法舒地尔组（12.5umol/L、25umol/L、50umol/L），培养24小时后，测定培养基中羟脯氨酸(HYP)含量，估算胶原含量。采用实时荧光定量PCR测定I型、III型前胶原mRNA表达。采用Westernblot法测定HSCs磷酸化肌球蛋白磷酸酯酶靶点亚单位1(p-MYPT1)水平，代表ROCK活性；细胞外信号调节激酶(ERK1/2)、c-Jun氨基末端激酶（JNK）和p38MAPK的磷酸化水平反应MAPKs信号通路的激活状态。结果：1高糖和法舒地尔对培养基中HYP含量的影响：与

7、对照组相比，高糖组HYP含量显著升高（17.55±0.80μg/mlvs.26.24±0.91μg/ml，P＜0.01）；与高糖组比较，高糖中加入法舒地尔（12.5umol/L、25umol/L、50umol/L）后，HYP含量呈浓度依赖性的显著减少（23.22±0.62μg/ml、21.58±1.16μg/ml、19.31±0.37μg/mlvs.26.24±0.91μg/ml，P＜0.01）。高渗透压组HYP含量与对照组相比无显著差异（17.24±0.67μg/mlvs.1中文摘要17.55±0.80μg/ml，P＞0.0