乙醛刺激对大鼠肝星状细胞wnt信号通路的影响及其意义

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1、乙醛刺激对大鼠肝星状细胞wnt信号通路的影响及其意义杨斌邛崃医疗中心医院内三科，四川成都611530摘要：目的通过观察乙醛刺激的肝星状细胞生长速度的变化以及细胞中Wnt信号通路中主要下游分子及目的基因mRNA表达的改变，探讨乙醛刺激对肝星状细胞活化的作用机制。方法用乙醛刺激大鼠肝星状细胞，与同时正常培养的大鼠肝星状细胞为对照［1］。由MTT法绘制细胞生长曲线并对比。同时釆用RT-PCR从mRNA水平观察Wnt信号通路相关指标的变化。结果从细胞生长曲线的对比可以清晰发现：大鼠肝星状细胞在乙醛刺激后的生长和增殖速度明显高于正常细胞组。

2、在乙酸刺激的大鼠肝星状细胞中，Wnt信号通路中β-catenin(β—链蛋白)的mRNA表达增强［2］。结论乙醛通过对大鼠肝星状细胞中Wnt信号通路的活化刺激大鼠肝星状细胞的增殖。关键词乙醛；肝星状细胞；Wnt信号通路。Abstract：ObjectiveWeexploredtheinfluenceofacetaldehydetorathepaticstellatecellsbyobservetheproliferationinrathepaticstellatecellsandthediversityofdo

3、wnstreammolecules’mRNAexpressioninwntsignalingpathway.Methodswepretreattherathepaticstellatecellwithacetaldehyde，usingnormalrathepaticstellatecellascontrol.DrawnthecellgrowthcurveusingthemethodMTT，meanwhileRT-PCRmethodswereusedinthestudyofdownstreammolecules&rsq

4、uo;mRNAexpressioninwntsignalingpathway.ResultsFromthecontrastofthecellgrowthcurve，wefoundclearlythatgrowthandproliferationrateofrathepaticstellatecellsstimulatedbyacetaldehydeisfasterthannormalrathepaticstellatecellascontrol..Wealsofoundthatβ-catenin(β-caten

5、in)geneexpressionareenhancedinrathepaticstellatecellstimulatedbyacetaldehyde.ConclusionTheacetaldehydecanenhancetherathepaticstellatecell’sproliferationthroughstimulatingthewntsignalingpathwayincell.KeyWords：hepaticstellatecells；WntSignalingpathway；salidroside肝星

6、状细胞的活化是肝纤维化的核心环节，是临床肝纤维化的基础。长期大量饮酒是肝纤维化其至肝硬化的重要病因，探讨乙醇的体内主要分解产物乙醛对肝细胞的刺激作用对临床上找到治疗洒精性肝纤维化的有效方法有重要意义。近年研宄发现Wnt信号通路与肝星状细胞（HSC）活化及肝纤维化发生相关［3］。当Wnt经典通路活化吋，Wnt与受体蛋白Frizzled结合并使未磯酸化的β-catenin在胞质中积累并转运到核中，从而激活转录因子，进-步激活细胞周期蛋白Cyclin-D基因等开始进行转录，刺激细胞增殖、永生化，去分化和转化等［4,5］。本实验

7、运用RT-PCR的方法，在RNA水平上，对经乙醛刺激的人鼠肝星状细胞中经典Wnt信号通路的代表分子β-catenin进行检测和比对。进一•步探讨乙醛对大鼠肝星状细胞活化的影响。1、材料和方法1.1实验材料大鼠HSC-T6细胞株，DMEMF-121：1培养基、小牛血清购自HyClone（Thermo）,40%乙醛购自成都市科龙化工试剂厂，RT-PCR试剂盒购至Takan公司，β-catenin弟克隆抗体购自SantaCruze公司。1.2实验方法1.2.1细胞的复苏和培养将大鼠HSC-T6细胞复苏。用DMEMF-

8、121:1完全培养基（20%小牛血清）培养，待细胞覆盖90%瓶底吋，分瓶传代，用25ml培养瓶继续培养细胞，备实验使用。1.2.2实验分组大鼠HSC-T6细胞传代24小吋后供实验，分为二组，为正常组、乙醛处理组。每组四瓶细胞。正常组用DMEMF-1