rna干扰技术在肝星状细胞活化信号通路的应用

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1、RNA干扰技术在肝星状细胞活化信号通路的应用燕晟阳学风南华大学附属南华医院消化内科，湖南衡阳421001[摘要]肝纤维化是各种致病因子致肝细胞损伤后的修复过度。肝星状细胞(hepaticstellatecell，HSC)的激活被认为是肝纤维化的核心环节，实验证实多条信号传导通路参与HSC的激活。RNA干扰(RNAinterference，RNAi)能有效沉默目的基因，以HSC活化信号通路为切入点，设计小干扰RNA(smallinterferingRNA，siRNA)抑制相关信号通路的活化，从而达到抑制HSC，激活是目前研究肝纤维化机制的主要手段。该研究综述

2、了RNAi技术在研究HSC活化信号途径中的作用，以求为治疗肝纤维化提供一种新思路。.jyqkultipleinjuries.Activatinghepaticstellatecellsisconsideredtobethecentraleventinliverfibrosis.Severalsignalingpatholeculartargetsofthesignalingpathail：[email protected]。肝纤维化是各种致病因子致肝细胞损伤后的修复过度，表现为肝结缔组织异常增生，可进一步发展为肝硬化甚至肝细胞癌，降低生活质量，出

3、现并发症，严重危及生命。HSC是形成肝纤维化的主要细胞，它的激活被认为是肝纤维化的核心环节。多种信号传导通路与该激活过程的调控有关。RNA干扰技术（RNAinterference，RNAi）能特异性沉默目的基因，针对HSC活化信号途径中的分子设计RNAi，能逆转肝纤维化。该研究着重阐述了肝星状细胞活化主要信号通路以及RNAi在这些信号通路的应用。1RNA干扰技术RNAi是通过沉默目标基因以研究基因和蛋白质功能的研究手段，被广泛的用于临床疾病研究。作用的起始阶段正义链和反义链混合的双链(double-strandedRNA，dsRNA)在细胞内与核酸内切酶Ⅲ

4、结合后，其被切割成siRNA。效应阶段siRNA则降解成正义链和反义链，后者与内切核酸酶以及其他蛋白一起形成RNA诱导的沉默复合物(RNA-inducedsilengcingplex，RISC)。RISC的核酸部分与外源性基因所表达mRNA靶向结合后，在结合部位切割mRNA，随即RISC的蛋白部分引起mRNA降解。进入扩增阶段，siRNA与mRNA结合，并将结合体作为引物，从而再次形成dsRNA。靶向mRNA全部降解致使目的基因沉默。2RNAi对致肝星状细胞活化主要信号通路的应用静止状态的HSC，细胞质内α-平滑肌肌动蛋白(smoothmuscleacti

5、n-α，α-SMA)较少。当肝脏受损时，HSC增殖活跃，细胞外基质(extracellularmatrix，ECM)分泌增多，胞质内α-SMA产生增多[1]，此即HSC活化。实验证明转化生长因子-β(transforminggroads信号通路TGF-β是超家族TGF中的一员，其除了在ECM形成方面起着重要作用外还影响细胞的增殖、分化。不少学者发现参与肝脏损伤修复的细胞如肝细胞，枯否细胞，内皮细胞分泌大量TGFβ1，TGFβ1通过其受体（主要为TβRⅠ及TβRⅡ）作用于HSC，分泌大量ECM，其中TGFβ1被认为是致肝纤维化最强的细胞因子。TGFβ1先与T

6、βRⅡ结合，再与活化的TβRⅡ激酶结合使TβRⅠ磷酸化，然后激活Smad2、3，Smad2、3与Smad4结合形成异源寡聚体，最后转入胞核中发挥调控作用[2]。有人用Smad3siRNA转染活化的HSC后胶原Ⅰ，Ⅲ，ⅠⅤmRNA表达受到了明显抑制，说明阻断TGF-β/Smad3信号传导途径能对抗纤维化进展。郑素军[3]等将Smad3-shRNA慢病毒感染HSC-T63后观察细胞增殖，Smad3-shRNA组较对照组细胞增殖明显下降(P=0．00)，表明Smad3-shRNA可阻断TGFβ1对HSC－T6细胞的促增殖作用。而其他学者利用siRNA靶向沉默TG

7、F-β1后，HSC激活相关指标均受到不同程度抑制，延缓肝纤维化进程，并一定程度上逆转肝纤维化。2.2的生成。CTGF在正常肝脏组织的CTGF表达很低，然而在肝纤维化患者体内其表达显著提高。整合素是跨膜蛋白家族成员之一，由α和β两个亚基构成，亚基上的胞外区与ECM相连，同时还是CTGF的细胞表面受体。Huang等[10]证实CTGF能与HSC表面整合素α5β1受体结合，在肝纤维化发生发展过程中发挥调节细胞增殖、黏附的功能。粘着斑激酶(focaladhesionkinase，FAK)是体内非受体型酪氨酸蛋白激酶之一，与相应配体结合后经不同的信号转导通路，调节细

8、胞生长、增殖、周期调控及凋亡等过程。FAK的N端与整合素亚基上的胞