miR-221对高糖诱导的腹膜间皮细胞EMT的影响及机制

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1、分类号：R692.5单位代码：10159密级：公开学号：201520199硕士学位论文中文题目：miR-221对高糖诱导的腹膜间皮细胞EMT的影响及机制英文题目：EffectandpossiblemechanismofmiR-221onEMTofperitonealmesothelialcellsinducedbyhighglucose论文作者：崔艳和指导教师：马健飞教授学科专业：肾内科完成时间：2018年2月中国医科大学硕士学位论文miR-221对高糖诱导的腹膜间皮细胞EMT的影响及机制Effectandpossiblemechanis

2、mofmiR-221onEMTofperitonealmesothelialcellsinducedbyhighglucose论文作者崔艳和指导教师马健飞教授申请学位医学硕士培养单位附属第一医院一级学科临床医学二级学科内科学（肾病）研究方向腹膜透析腹膜纤维化论文起止时间2016年5月-2018年2月论文完成时间2018年2月中国医科大学（辽宁）2018年3月中国医科大学硕士学位论文摘要miR-221对高糖诱导的腹膜间皮细胞EMT的影响及机制前言腹膜透析（PD）是治疗终末期肾脏病(ESRD）患者有效的替代方法之一。腹膜长期与非生理的高糖透析

3、液接触及炎症反应的发生等多种因素，发生腹膜纤维化，成为患者退出腹膜透析的主要原因。经上皮－间充质细胞转分化（EMT）而形成的肌成纤维细胞是参与腹膜纤维化的最主要细胞。EMT的特征是上皮细胞标志的丢失以及胞外基质的积聚，主要包括：上皮细胞粘连连接的丧失，例如钙粘蛋白(E-cadherin)表达下调，重组细胞骨架，瓦解基底膜，以及细胞迁移增强、侵袭能力增强等。小分子RNA(microRNA,简称miRNA)，是存在于动植物基因组中，功能性、非编码、小分子RNA，有保守性、基因集簇现象及特异性表达等特点。miRNA在细胞的生命活动中起着非常重要

4、的作用，并且几乎涉及所有生物学进程。既往研究表明，miRNA可参与调节多种组织细胞的EMT过程，包括心脏、肝脏、肺、肾等。最新的研究表明：miRNA29c,miRNA193a等可介导高糖诱导的人腹膜间皮细胞EMT。miR-221与肿瘤和纤维化疾病显著相关，miR-221属于miR-221/222基因家族，miR-221可促进乳腺癌的发生，并且在甲状腺乳头状癌、前列腺癌中表达明显升高。研究表明：其家族成员可能通过调节肿瘤细胞及其他组织细胞的EMT过程，参与肿瘤的转移与侵袭，以及组织器官的纤维化，并且可以通过调控表达，进而有效地降低或逆转EM

5、T和纤维化程度。探讨miR-221对高糖诱导的腹膜间皮细胞EMT的影响及机制，为减轻EMT及腹膜纤维化提供新的思路。材料与方法1、实验动物：清洁级SD雄性大鼠，体重180-220克，8周龄。2、人腹膜间皮细胞株HMrSV5。3、腹腔注射4.25%标准腹透液,建立腹膜透析组大鼠模型，周期28天。处死大鼠，取大鼠脏层腹膜，提取组织蛋白和mRNA，用WesternBlot、RealTimeI中国医科大学硕士学位论文PCR法检测E-cadherin、vimentin，PIK3R1，及miR-221表达。4、Targetscan软件预测miR-22

6、1的靶基因。荧光素酶报告基因明确miR-221的靶基因。5、Highglucose（2.5%）刺激HMrSV524h、48h后，用Western-blot、RealtimePCR法检测E-cadherin、vimentin，PIK3R1，及miR-221表达。6、HMrSV5细胞中转染miR-221inhibitor及对照，利用高糖处理后，检测E-cadherin、vimentin，PIK3R1表达。Trsnswell分析细胞迁移能力。7、HMrSV5细胞中转染PIK3R1及对照，利用高糖处理后，检测E-cadherin，Vimentin

7、。Trsnswell分析细胞迁移能力。实验结果1、大鼠模型组28天后，大鼠腹膜E-cadherin表达减少、vimentin表达增多,PIK3R1表达减少，miR-221表达增多。2、Highglucose（2.5%）刺激HMrSV524h、48h后，HMrSV5细胞中E-cadherin表达减少、vimentin表达增多,PIK3R1表达减少，miR-221表达增多。3、Targetscan软件分析PIK3R1基因3＇UTR区存在miR-221结合位点，进一步荧光素酶报告基因分析明确PIK3R1基因3＇UTR区522-528为miR-2

8、21结合位点。4、HMrSV5细胞中转染miR-221inhibitor及对照，利用高糖处理后，转染miR-221inhibitor的HMrSV5细胞较对照组细胞E-cadherin和PIK3