肝素对高糖诱导的水通道蛋白在人腹膜间皮细胞上表达的影响

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1、独创性声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得大连医科大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名：銮鱼签字日期：礁年』月苎日学位论文版权使用授权书本学位论文作者及指导教师完全了解大连医科大学有关保留、使用学位论文的规定，同意大连医科大学保留并向国家有关部门或机构送交

2、学位论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权大连医科大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。论文作者签名：窒鱼指导教师签名钆么錾!篁公i塑签字日期：礁年立月必，肝素对高糖诱导的水通道蛋白在人腹膜间皮细胞上表达的影响硕士研究生：指导老师：指导小组：专业名称：摘李鸽赵久阳教授张怡玲教授徐茂兰副教授内科学要目的：水通道蛋白(aquaporin，AQP)是Agre等人于1988年分离红细胞Rh血型抗原的～段32KD多肽的过程中

3、无意得到的一段28KD的多肽，看来被证实为介导细胞内外水转运的通道，在微生物、植物、哺乳动物中广泛存在，并在多种器官的生理和病理中发挥重要作用。本研究酸在通过肝素对葡萄糖诱导体外培养的人腹膜间皮细胞(humanperotonealnesothelialcells，HPMCs)对AQPl、AQP3mRNA及骚自表达的影响。方法：从连续不卧床腹膜透析(continuousambulatoryperitonealdialysis，CAPD)治疗的慢性肾脏病患者腹膜透析流出液中分离并培养人腹膜间皮细胞，第二代细

4、胞应用免疫组化方法进行细胞鉴定，第三代细胞用于实验，分剐按照不同的实验要求分成2．5％葡萄糖组、2．5％葡萄糖加2．5×lO．3mg／ml肝素组、2+5％葡萄糖加5×l0．3mg／ml肝素组、2。5％葡甍糖加1．5×1O．2mg／ml肝素组。采用逆转录多聚酶链式反应(Reversetranscriptionpolymerasechainreaction。RT-PCR)半定量分HPMCs中AQPl、!AQP3mRNA的表达水平，采用免疫细胞化学法检测HPMCs上AQPl、AQP3的蛋自表达水平。结果：一、

5、葡萄糖及肝素诱导腹膜间皮细胞AQPl、AQP3mRNA的影响l、用2．5％葡萄糖、2．5％葡萄糖加2．5×10-3mg／ml肝素分剐处理HPMC不同时间后检测，结果显示葡萄糖可显著诱导闻皮细胞表达AQPlmRNA上调，并随时间延长而增多，与无糖组比较具有显著的统计学差异，且AQPImRNA表达量在24小时最大(t一53．576，P<0．01)。而葡萄糖组与葡萄糖加肝素组比较无显著统计学差异(P>0．05)。2、用2．5％葡萄糖、2．5％葡萄糖加2，5×l0-3mg／ml肝索分别处理HPMC不同时间后检测

6、，结果显示葡萄糖可显著诱导间皮细胞表达AQP3rnRNA上调，并随时间延长丽增多，与无糖组院较具有显萋的统计学差异，且AQP3mRNA表达量在24dx时最大(t一43．743，P<0．01)。而葡萄糖组与葡萄糖加肝素组比较无显著统计学差异(P>0．05)。3、用2。5％葡萄糖、2．5％葡萄糖加不同浓度的肝素(2，5×lO一3mg／ml、，5×10．3mg／ml、1．5×lO．2mg／m1)分别处理HPMC4小时看，检测细胞表达AQP1mRNA的变化。结果显示葡萄糖及葡萄糖加肝索组AQP1mRNA表达均高

7、于无糖组，有显著统计学差异(P<0．05)，但葡萄糖组与葡萄糖加{2．5×l0．3mg／ml、5×lO．3mg／ml肝素组吃较无显著统计学差异(P>0。05)，丽葡萄糖加1．5×lO．2mg／ml肝素组比葡萄糖组AQPlmRNA的表达量明显增加(tm-37．676，P<0．05)。4、震2．5％葡萄糖、2．5％葡萄糖搬不固浓度的肝素(2。5×l0-3mg／ml、5×l0-3mg／ml、1．5×l0"2mg／m1)分别处理HPMC4小时后，检测细胞表达AQP3mRNA的变化。结果显示葡萄糖及葡萄糖加肝索组

8、AQP3mRNA表达均离子无糖组，有显著统计学差异(P0．05)，两葡萄糖加1．5×l0-2mg／ml肝素组比葡萄糖组AQP3mRNA的表达量明显增加(t一30．578，P<0．05)。二、麓萄糖及翳素诱导腹膜闻皮缨臆AQPl、AQP3的影响免疫细胞化学结果显示无糖组见棕黄色颗粒主要分布在胞浆和胞膜上；与无糖组比较，葡萄糖和葡萄