wntβ-catenin通路及mir-200a在高糖诱导的人足细胞损伤中的作用

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1、中图分类号R692．6UDC61O硕士学位论文学校代码—』533密级公珏Wn邯-catenin通路及miR-200a在高糖诱导的人足细胞损伤中的作用TheroleofWnt／p—cateninpathwayandmiR一200aintheprocessofhumanpodocyteinjury一inducedbyhighglucose作者姓名：刘洋学科专业：临床医学研究方向．：内科学学院(系、所)：湘雅二医院指导教师：刘虹教授论文答辩日期卯l≯·j-2乡答辩委员会主鹿塞导丝么过中南大学二。一三年五月原创性声明本人声明，所呈交的学位

2、论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了论文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得中南大学或其他单位的学位或证书而使用过的材料。与我共同工作的同志对本研究所作的贡献均已在论文中作了明确的说明。作者签名：孟!当三盖曰期：型年』月翌日学位论文版权使用授权书本人了解中南大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留学位论文并根据国家或湖南省有关部门规定送交学位论文，允许学位论文被查阅和借阅；学校可以公布学位论文的全部或部分内容，可以采用复印、缩印或其它手

3、段保存学位论文。同时授权中国科学技术信息研究所将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》，并通过网络向社会公众提供信息服务。作者签名：监导师签名鲨日期：塑年三月生日摘要：Wnt／li—catenin通路及miR-200a在高糖诱导的人足细胞损伤中的作用目的观察高糖刺激人足细胞时是否引起Wnt／13-catenin通路激活，及对miR．200a和足细胞标志蛋白nephrin表达的影响，初步探讨Wnt／[3．cateninJ道_路和miR．200a与足细胞损伤的关系。转染miR-200a一3pmimics至足细胞，检测高糖刺激足细胞

4、不同时间miR-200a、13-catenin、nephrin的表达变化，观察miR-200a-3pmimics对人足细胞Wnt／[3．catenin通路活性的影响及能否减轻足细胞损伤。方法以分化成熟的人足细胞为研究对象，随机分为：正常对照组，25mM高糖分别刺激6、12、24小时组，及25mM甘露醇等渗对照组，采用实时定量PCR方法检测13-catenin、nephrinmRNA以及miR-200a的表达水平；采用蛋白印迹方法测定13-catenin、nephrin蛋白表达水平。将miR-200a-3pmimics转染至分化成熟

5、的足细胞，分组如下：(1)高糖组；(2)转染miR-200a-3pmimics+高糖刺激6h组(3)转染miR一200a-3pmimics+高糖刺激12h组(4)转染miR-200a-3pmimics+高糖刺激24h组(5)转染miR-200amimicsnegativecontrol+高糖列激24h组。采用实时定量PCR方法检测13-catenin、nephrinrr武NA及IImiR-200a的表达水平；采用蛋白印迹检测p．catenin、nephrin蛋白表达水平。结果(1)人足细胞正常培养条件下表达nephrin，miR一

6、200a，表达少量[3-catenin。(2)人足细胞经高糖刺激后，p-cateninmRNA和蛋白表达量随刺激时间的延长逐渐上调。甘露醇组[3-cateninmRNA表达量与对照组相比差异均无统计学意义。(3)人足细胞经高糖刺激后，nephrinmRNA和蛋白表达量随刺激时间的延长逐渐下调。甘露醇组nephrinmRNA表达量与对照组相比差异均无统计学意义。(4)人足细胞经高糖刺激后，miR-200a的表达量随刺激时间的延长逐渐下调，其中高糖刺激12h和24h组与对照组比较，差异有统计学意义。甘露醇组与对照组相比差异均无统计学意

7、义。(5)miR-200a-3pmimics转染至人足细胞后，miR-200a的表达明显上调。转染miR．200amimicsnegativecontrol+高糖刺激24h组miR-200a的表达量与高糖组比较差异无统计学意义。(6)转染miR-200a-3pmimics的人足细胞经高糖刺激不同时间后，[3-cateninmRNA和蛋白表达量逐渐下调。转染miR一200amimicsnegativecontrol+高糖刺激24h组[3-cateninmRNA和蛋白的表达量与高糖组比较差异无统计学意义。III(7)转染miR-200

8、a-3pmimics的人足细胞经高糖刺激不同时间后，nephrinmRNA和蛋白表达量逐渐上调。转染miR-200amimicsnegativecontrol+高糖刺激24h组nephrinmRNA和蛋白的表达量与高糖组比较差异无统计学意义。结论(