mir-139-5p在高糖内皮细胞损伤中的作用

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1、万方数据中图分类号整墨Z：!UDC§!Q八年制博士学位论文学校代码lQ塾3密级公珏mill一139—5p在高糖内皮细胞损伤中的作用TheroleofmiR-139-—5pindiabeticendothelialdysfunction作者姓名：学科专业：研究方向：学院(系、所)：指导教师：申睿婷临床医学内科学湘雅三医院莫朝晖教授论文答辩日期趔生。量。丝答辩委员会主席中南大学2014年5月㈣渊万方数据学位论文原创制t．st明一本人郑重声明，所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了论文中特JjUDl

2、：i以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得中南大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我共同工作的同志对本研究所作的贡献均已在论文中作了明确的说明。申请学位论文与资料若有不实之处，本人承担一切相关责任。作者签名：壹盎缮日期：监年垦月盟日学位论文版权使用授权书本学位论文作者和指导教师完全了解中南大学有关保留、使用学位论文的规定：即学校有权保留并向国家有关部门或机构送交学位论文的复印件和电子版；本人允许本学位论文被查阅和借阅；学校可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可

3、以采用复印、缩印或其它手段保存和汇编本学位论文。保密论文待解密后适应本声明。作者签名：监日期：雌年上月4日斛导师签每翌塑二z_吼声带上啤日万方数据摘要miR一139—5p在高糖内皮细胞损伤中的作用目的：探讨miR一139．5p在高糖诱导下内皮细胞中表达的变化及其对内皮细胞功能的调控作用。方法：1．体外培养的人脐静脉内皮细胞(humanumbilicalveinendothelialcells，HUVECs)，利用microRNA实时定量PCR的方法检测持续的高糖(30mmol／L)束lJ激下miR一139—5p表达水平在7天内的变化情

4、况，与在正常糖(5mmol／L)下培养的HUVECsmiR一139—5p表达水平对比；2．通过miRNAmimic或miRNAInhibitor外源性的上调或下调HUVECsmiR．139．5p表达水平，用划痕实验和tranwell小室实验检测迁移能力，用CCK．8试剂盒检测增殖能力，通过检测HUVECs的Caspase3活性检测凋亡情况，并用体外成管试剂盒检测成管能力；3．通过WesternBlot方法检测IGF一1R、pIGF一1R、Akt、pAkt、VEGFA、Erkl／2及pERKI／2蛋白表达水平，以确定miR一139．5p

5、的靶蛋白及其信号通路。结果：1．miR．139—5p表达随高糖作用时间的延长而增高(PO．05)。2．细胞划痕实验和transwell小室迁移实验显示，miR．139．5p高表达时细胞迁移能力被抑制(P<0．05)，而抑制miR一139—5p表达时细胞迁移增强(P<0．05)；上调miR一139．5p表达促进细胞增殖(P<0．05)；miR一139．5p表达上调48小时对内皮细胞凋亡无明显影响(P>0．05)，而

6、96小时后显示内皮细胞凋亡增加(PO．05)，而其活化形式pAkt蛋白表达随之变化(P

7、／2及pERK表达均无明显变化(P>O．05)。结论：人脐静脉内皮细胞在高糖作用下miR一139—5p表达增加，miR一139—5p通过抑制IGF一1R／Akt／通路及VEGF的表达，使内皮细胞迁移、增殖能力减弱，凋亡增加，从而导致其成管功能受损。因此，高糖促进miR一139-5p表达上调可能是介导糖尿病内皮功能损伤的重要因素。万方数据图21幅，表11个，参考文献40篇。关键词：高糖；miR一139—5p；内皮功能；IGF一1R分类号：R587．1万方数据Theroleofmill—-139-·5pindiabeticendothel

8、ialdysfunctionABSTRACTObjective：TheaimofthestudywastodeterminewhetherexpressionofmicroRNA139(miR一139—5p)isindu