cck-8对lps诱导小鼠单核巨噬细胞raw264.7细胞内质网应激的影响

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2、别加以标注等内容外，文中不包含其他人已经发表或撰写的研究成果，指导教师对此进行了审定。本论文由本人独立撰写，文责自负。研究生签名：导师签章：嗲。＼≤每b月们日f万方数据目录中文摘要1英文摘要5英文缩写10研究论文CCK．8对LPS诱导小鼠单核巨噬细胞RAW264．7细胞内质网应激的影响前言剐吾11材料与方法12结果23附图25讨论31结论33参考文献33综述内质网应激与炎症相关性疾病的研究进展36致谢44个人简历45万方数据中文摘要CCK-8对LPS诱导小鼠单核巨噬细胞RAW264．7细胞内质网应激的影响摘要目的：炎症是组织对各

3、种损伤因子的刺激所发生的一种以防御反应为主的基本病理过程。而炎症失控是感染性疾病并发多器官功能障碍(Multipleorgandysfunctionsyndrome，MODS)的主要发病机制，单核一巨噬细胞的活化在诱导炎症反应中起关键作用。在脂多糖(1ipopolysaccharide，LPS)或其它致炎因素作用下，单核巨噬细胞生成并释放大量的促炎因子，包括IL．16、IL一6等，这些促炎因子的过度释放可引起机体自身组织损伤，导致全身性炎症反应综合征，最终导致MODS甚至死亡。因此，有效控制单核巨噬细胞的过度激活将对减轻机体炎症

4、反应起到积极的保护作用。内质网是真核细胞蛋白质合成的主要场所，对应激原的刺激十分敏感。各种应激原作用后通过诱发内质网腔中错误折叠和未折叠蛋白的堆积而激活未折叠蛋白反应(unfoldedproteinresponse，UPR)及细胞凋亡等内质网反应，导致内质网功能紊乱，引发内质网应激(Endoplasmicreticulumstress，ERS)。有研究发现，ERS在LPS诱导巨噬细胞的炎症反应中发挥关键作用，LPS攻击巨噬细胞可引起内质网腔内错误折叠及未折叠蛋白质增多，内质网分子伴侣葡萄糖调节蛋白78(78一kDaglucose

5、．regulatedprotein，GRP78)转而与之结合，释放肌醇需要元件．1(inositolrequiringelement一1，IREl)，IREl活化切割转录因子X盒结合蛋白l(X—boxbindingprotein1，XBPl)mRNA，使XBPlmRNA由无活性形式转为活性形式，翻译成XBPl蛋白，作用于内质网应激反应元件(ERstressresponseelement，ERSE)，促进C／EBP同源蛋白(C／EBPhomologousprotein，CHOP)基因的转录和表达，CHOP表达增高，可激活半胱天冬蛋

6、白酶．1l／半胱天冬蛋白酶一1(caspase。11／caspase．1)信号通路，促进IL一1B的生成，诱发炎症相关性疾病。因此控制ERS的程度对抑制LPS诱导的炎症反应具有重要意义。胆囊收缩素(cholecystokinin，CCK)是一类广泛存在于体内多个系统的脑．肠肽，参与多种生物学功能的调节，如神经．体液调节、记万方数据中文摘要忆及摄食调节等。CCK在体内存在多种形式，其中八肽胆囊收缩素(cholecystokininoctopeptide，CCK-8)是存在于小肠、血液及中枢神经系统内最重要的形式。本实验室以往研究发

7、现，八肽CCK(CCK一8)具有一定的抗炎和免疫调节作用，能减轻内毒素休克大鼠肺脏、肝脏、脾脏、肾脏间质水肿及白细胞的浸润等病理损伤，同时抑制体内多种促炎因子的释放。因此CCK．8对于治疗炎症相关性疾病具有较好的应用前景，但CCK．8对LPS诱导的巨噬细胞ERS启动炎症反应信号通路有何调节作用，尚未见文献报道。基于以上研究背景，本实验选择可稳定传代的小鼠单核巨噬细胞RAW264．7细胞探讨这一科学问题，对于阐明CCK．8的抗炎机制以及药物开发应用具有重要意义。方法：l选用小鼠单核巨噬细胞(购自中国科学院上海细胞库)RAW264．

8、7细胞作为研究对象。2实验分组：将小鼠RAW264．7细胞按随机数字表法分为6组：对照组(Con组)：用无血清DMEM／高糖培养基培养；LPS组：用含0．599／mlLPS无血清的培养基培养；CCK．8组：用含10。69mol／mlCCK．8无血清培养基培养；C