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1、槐定碱预处理对LPS诱导的RAW264.7巨噬细胞c-Jun表达的影响作者：刘静，张巍，杨峰，黄菱，周娅【摘要】 目的观察槐定碱预处理对LPS刺激RAW264.7巨噬细胞c-Jun表达的影响，探讨槐定碱抗内毒素机制。方法培养RAW264.7巨噬细胞，以槐定碱（31.25mg·L-1）预处理细胞24h后给予LPS(E.coliO55:B5)100μg·L-1刺激细胞，并于刺激后5、30、60、120min收集细胞；再以槐定碱31.25、15.63、7.81mg·L-1三个浓度同上预处理细胞，于LPS刺激后60min收集细胞。利用免疫细胞化
2、学技术检测RAW264.7巨噬细胞中c-Jun的表达。结果单独槐定碱对c-Jun表达无影响；LPS模型组各时间点c-Jun阳性细胞数均显著高于巨噬细胞对照组（P＜0.01），且随LPS刺激时间延长而升高，持续升至120min；槐定碱预处理组在LPS作用后30、60、120min时c-Jun阳性细胞数均较同时间点LPS模型组降低，差异有统计学意义（均P＜0.01），但槐定碱预处理组各时间点c-Jun阳性细胞数无明显变化。不同浓度槐定碱（31.25、15.63、7.81mg·L-1）预处理细胞，对LPS刺激的c-Jun表达均有显著抑制作用（均
3、P＜0.01），且31.25mg·L-1的作用强于另两个浓度（15.63、7.81mg·L-1），差异有统计学意义（均P＜0.05）。结论槐定碱预处理RAW264.7巨噬细胞能显著抑制LPS诱导的c-Jun蛋白表达，其作用有剂量依赖性。12【关键词】槐定碱；LPS；RAW264.7巨噬细胞株；c-Jun Abstract:ObjectiveToexploretheanti-endotoxinfuctionsanditsmechanismsbyobservingtheeffectsofSophoridinepretreatingonthe
4、expressionofc-JuninmacrophageRAW264.7inducedbyLPS.MethodsCulturedRAW264.7cells,usingLPS(E.coliO55:B5)atfinalconcentrationof100μg·L-1tostimulatecellafterSophoridinepretreatingcellsfor24hours,andcollectingcellsat5min,30min,60min,120minafterstimulating;thenusingSophoridine(3
5、1.25,15.63,7.81mg·L-1)preatreatingcellsagain，andcollectingcellsat60minafterLPSstimulating.Theexpressionofc-JuninmacrophageRAW264.7wasdetectedbyImmunocytochemistry.ResultsSingleSophoridinehadnoeffectontheexpressionofc-Jun.Thepositivecellsofc-JunofLPSmodelgroupateachtimespo
6、tweresignificantlyhigherthanthoseofmacrophagecontrolgroup(P＜0.01),andthepositivecellsascendedalongwithtime,reachedsummitat120min.ComparedwithLPSmodelgroup,thepositivecellsofc-JuninSophoridinepretreatinggrouphadsignificantlydecreasedafterLPSstimulatingat30min,60min,120min(
7、allP＜0.01),butthenumberofthepositivecellsofc-JunofSophoridinepretreatinggroupshadnoobviouschangeateachtime12spot.Differentconcentration(31.25,15.63,7.81mg·L-1)Sophoridinepretreatingcellshadsignificantlyinhibitoryaction（allP＜0.01）,andtheactionof31.25mg·L-1hadtheadvantageov
8、erotherconcentration(15.63,7.81mg·L-1)(allP＜0.05).conclusionSophoridinepretreatingmacrophageRAW2
