矿化胶原对小鼠巨噬细胞RAW264.7极化影响的实验研究

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1、分类号：R783.1单位代码：10159密级：公开学号：201521156硕士学位论文（口腔医学硕士学术学位）中文题目：矿化胶原对小鼠巨噬细胞RAW264.7极化影响的实验研究英文题目：TheeffectofmineralizedcollagenonRAW264.7macrophagepolarization:anexperimentalstudy论文作者：史秀娣指导教师：马红梅副教授学科专业：口腔基础医学完成时间：2018年3月中国医科大学硕士学位论文矿化胶原对小鼠巨噬细胞RAW264.7极化影响的实验研究Theeffectofmineralizedcollage

2、nonRAW264.7macrophagepolarization:anexperimentalstudy论文作者史秀娣指导教师马红梅副教授申请学位医学硕士培养单位口腔医学院一级学科口腔医学二级学科口腔基础医学研究方向口腔材料学论文起止时间2016年5月—2018年3月论文完成时间2018年3月中国医科大学（辽宁）2018年3月I中国医科大学硕士学位论文摘要目的：随着组织工程和再生医学的发展，越来越多的学者认识到生物材料能够用于调控炎症反应，理解生物材料与机体免疫系统之间的相互作用变得非常重要。其中巨噬细胞在该过程中发挥了关键性作用，其M1/M2（经典活化巨噬细胞/

3、替代活化巨噬细胞）极化状态和炎性分泌功能会影响组织的预后。矿化胶原（MineralizedCollagen,MC）由羟基磷灰石（Hydroxyapatite,HA）和胶原（Collagen,COL）两种成分构成，与天然骨组织具有相同的化学组成及微观结构，具有优于羟基磷灰石的骨诱导性。然而，生物材料植入体内后最早期的状态是手术创伤及炎症反应，其修复过程并非仅与成骨细胞相关。目前矿化胶原植入体内后对免疫系统的影响尚不明确。因此有必要就矿化胶原植入体内对巨噬细胞极化及炎症功能的影响进行深入研究，全面分析其植入体内后的生物反应，更加全面的诠释矿化胶原的优异性能，为其今后在临

4、床的应用奠定基础。研究方法：将RAW264.7小鼠巨噬细胞分别接种于培养玻片（空白对照组，LPS+IFN-γ诱导组，IL-4诱导组）、MC、HA和COL表面，在相应的时间点：1.应用免疫荧光方法观察细胞形态，用NIS-ElementsD软件计算细胞铺展面积。2.应用免疫荧光方法检测巨噬细胞膜表面M1/M2特异性标志分子CD86/CD206的表达。3.应用ELISA方法检测巨噬细胞培养上清液中炎症相关细胞因子TNF-α和IL-10的分泌水平。结果：1.MC、HA和COL表面巨噬细胞形态均与对照组不同且三组之间也有差异。LPS+IFN-γ诱导组细胞铺展面积（522.96

5、4±113.0528μm2）最大，显著高于其他5组（P<0.0001）；HA表面细胞铺展面积（415.695±98.681μm2）是MC表面细胞铺展面积（242.004±31.759μm2）的1.7倍，二者之间具有显著差异（P<0.0001）。2.MC表面增加了CD206+巨噬细胞（M2）的表达；HA表面则表达更多的CD86+巨噬细胞（M1）；COL在3d时生成的CD86+/CD206+共表达型巨噬细胞最多。3.MC增加了抑炎细胞因子IL-10的分泌，HA增加了促炎细胞因子TNF-α的分泌。结论：矿化胶原（MC）能够诱导巨噬细胞RAW264.7向M2型极化，在刺激机

6、体炎症反应方面性能优于羟基磷灰石（HA）和胶原（COL），更有利于组织重建。关键词：巨噬细胞；矿化胶原；羟基磷灰石；极化；炎症反应I中国医科大学硕士学位论文AbstractObjective:Withthedevelopmentoftissueengineeringandregenerativemedicine,anincreasingnumberpeoplebegintorealizethatbiomaterialscanbeusedtoregulatetheinflammatory.Understandingtheinteractionbetweenbiomat

7、erialsandimmunesystemhasbecomemoreandmoreimportant.Macrophagesplayakeyroleinthisprocess,theM1/M2polarizationstateandinflammatorysecretionaffectstheprognosisoftheorganization.Mineralizedcollagen(MC)whichisconsistofhydroxyapatite(HA)andCollagen(COL)hasthesamechemicalcomponentsandmicros