幽门螺杆菌caga基因的克隆 表达 免疫原性测定及其对胃上皮细胞凋亡的影响

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1、硕士学位论文中文摘要第二章幽门螺杆菌oagA基因在胃上皮细胞中的表达及其对细胞凋亡的影响目的：构建含cagA基因的真核表达载体，并在胃上皮细胞GES-1中表达，观察其表达和定位情况及其对细胞凋亡的影响。方法：将合成的cagA基因片段从puc57-cagA质粒中切出，分别克隆至绿色荧光蛋白表达载体pEGFP-C1及表达载体pCDNA3．1-his／myc-A，用脂质体法分别将重组表达载体转染入胃上皮细胞GES-1中，用荧光显微镜观察其在GES-1细胞中的表达及定位，用荧光实时定量PCR及Western-blot检测cagA基因在细胞中的

2、表达情况。用流式细胞仪观察CagA蛋白对细胞凋亡的影响。结果：1．成功构建pEGFP-CI-cagA和pCDNA3．卜his／myc—A—cagA真核表达质粒，目的基因的测序结果与设计的序列完全一致。2．绿色荧光蛋白表达质粒pEGFP-C卜cagA转染GES-1后，其表达分布于细胞质和细胞核中。3．表达质粒pCDNA3．卜his／myc—A—cagA转染GES-1细胞后，cagA基因在细胞中获得了表达。4．转染pCDNA3．1．his／myc—A—cagA的GES-1细胞行流式细胞仪分析示CagA蛋白有促进细胞凋亡的作用。结论：1．成

3、功构建幽门螺杆菌cagA基因的真核表达质粒，并在胃上皮细胞株GES-1中获得了表达，且在细胞质和细胞核内均有表达。2．经流式细胞仪分析，CagA蛋白具有促进胃上皮细胞株GES-1凋亡的作用。关键词：幽门螺杆菌，cagA基因，表达，细胞凋亡ⅡABSTRACTPart1Thestudyofclone，nucleusresponseandimmunogenicityofthecagAgeneofHelicobacterpyloriobjective：ThisstudyisaimedtoclonethespecificcagAgenesegm

4、entofthegastriccanceridiotypeHelicobacterpylori(H．pylori)。establishthesystemofprokaryoticexpressionandidentifytheImmunogemcRyofsequencesofrecombinationsignal．AnditalsohopedtosetthefoundationforpickingoutthestraininH．pyloricorrelatedtogastriccanceranddirectiontherapyincl

5、inical．Methods：SelectthesixthtypecagAfragmentwhichWasconceivabletoberelatedtogastriccanserinearlierresearch．It’SidentifiedaSAAG09884inGenBank．ThenthetllecagAgenesegmentWasoptimizeddesignedandcomposition．Theincisionenzymesitesonbothendsofthisgenewereincreasedseparately．T

6、hesynthesizedcagAgeneWascutfromthepuc57-cagAplasmidandthenwascarriedbyexpressionvectorpET32atotransformedintothehostbacterium(type)BL21(DE3)．ThenthepositiveclonedpET32a-cagAwasselectedbyreceptivityofanilineandcolonyPCR．TheHostBacteriumwithpET32a-CagAwIereaffectedtoexpre

7、ssfusionproteinbyPTGTheexpressionoftheCagAproteinwasanalyzedbySDS．PJ～GEgelelectrophoresisandtheantigenicityofthefusionproteinwasexaminedbyWestern-blot．Results：1．Targetgenesynthesis：DesignandsynthesizecagAgene(AAG09884)，whichiS678bplong，andencodes228aminoacid(figurel-1)。

8、TheresultofsequencedeterminationshowsthatthesequenceofsynthesiscagAgenewasthesameastheonethatwedesigned．2．This