幽门螺杆菌caga基因对胃癌细胞影响

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1、幽门螺杆菌cagA基因对胃癌细胞影响【关键词】幽门螺杆菌；CagA；细胞增殖；细胞凋亡　　摘要：目的观察幽门螺杆菌（Hp）野生株与cagA基因同源缺失突变株对人胃癌细胞株BGC823的细胞增殖和凋亡的影响，探讨与Hp毒力基因cagA相关的细胞水平的毒性效应。方法将幽门螺杆菌野生株与cagA基因缺失突变株与BGC823细胞共培养，分别在6，12，24和48h观察细胞形态学变化，采用四甲基偶氮噻唑蓝（MTT）比色法检测细胞增殖活性，流式细胞仪检测细胞凋亡情况。结果野生株和突变株Hp攻击BGC823细

2、胞6h，即可引起细胞的形态学变化，48h时均可观察到细胞形态呈分散及蜂鸟样改变（细胞拉伸）。MTT法检测显示，野生株对BGC823细胞增殖具有抑制作用，而缺失cagA基因的突变株可刺激细胞增殖，且在24，48h的2个时间点上均高于对照组和野生株组（P<005）。流式细胞分析显示，在攻击BGC823细胞48h后，野生株和突变株均可引起细胞凋亡，凋亡率高于对照组（P<005），2个实验组的凋亡率差异无统计学意义。结论Hp作用后细胞呈分散和蜂鸟样改变（伸长）并不是cagA基因特有的细胞学效

3、应；cagA基因是Hp抑制细胞增值所必需的元素；cagA基因的有无对Hp致凋亡效应的影响不大，在Hp致细胞凋亡的效应中作用可能有限。　　关键词：幽门螺杆菌；CagA；细胞增殖；细胞凋亡　　EffectsofcagAgeneofhelicobacterpylorionBGC823cells　　　Abstract:objectiveToobservetheeffectsofacagA-deletedmutantstrainofChineseH.pylorionthephenotypes,prolif

4、erationandapoptosisinhumangastriccancercelllineBGC823invitro,andtodeterminethecytotoxicityofcagA,oneofthevirulencegeneofH.pylori.MethodsBGC823cellsutant,utantstaingroup,respectively.Thecellphenotypeinedbymethylthiazolyltetrazolium(MTT)method.Theinduc

5、tionofapoptosisinedbyfloetry.ResultsThechangesofcellmorphologymingbirdmorphology(cellelongation)utantstraingroupthanthatofthecontrolgroupandtheonstratedbyfloetry,theapoptoticrateinboththeutantgroupmingbirdphenotype(cellelongation)orphologycharacteris

6、ticsspecificrelatedtothecagAgeneaftertreatedayplaythecrucialroleinH.pylori'sactionsofinhibitingcellularproliferation;ThecagAgenemayhavetheonlylimitedeffectsonthecellularapoptosisinducedbyH.pylori.　　Keyg／L、多粘菌素B2500U／L、TMP5mg／L、两性霉素5mg／L），37℃、微需氧条件下（1

7、0％CO2，5％O2，85％N2）培养，3d后收集细菌，用PBS制成细菌悬液，在分光光度计上测定细菌浓度（1A660=1×108CFU/ml），然后用含10％胎牛血清的无抗生素RPMI-1640培养液调整适当浓度用于攻击细胞。　　122BGC823细胞培养BGC823细胞的培养基为含10％胎牛血清的无抗生素RPMI-1640培养液，细胞置于37℃含5％CO2的培养箱中常规培养。　　123BGC823细胞与Hp共培养BGC823细胞于37℃含5％CO2的培养箱中培养，24h后换用含Hp的细菌悬液，

8、置于37℃微需氧环境中共培养；对照组只含10％胎牛血清的无抗生素RPMI-1640培养液；野生株组和突变株组细菌与细胞的比例均为100∶1。　　124细胞形态学观察BGC823细胞以1×104个/孔接种于24孔板中，分别于细菌与细胞共同培养的6，12，24，48h对细胞形态进行观察。　　125细胞增殖测定采用MTT法，细胞以5×103/孔密度接种于96孔板上，每组设6个复孔，分别在细菌与细胞共培养的12，24，48h于每孔加入MTT20μl，置37℃、5%CO2培养箱继续培养4h后，弃孔内培养上