幽门螺杆菌对人胃癌细胞SGC7091形态的影响

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1、江苏大学硕士学位论文摘要自1982年RobinJW和MarshallB等人首次从胃炎和消化性溃疡患者胃窦分离出幽门螺杆菌(Helicobacterpylori，H砂ZD一)以来，因其感染与消化道疾病密切相关，其致病机制一向是研究的焦点。幽门螺杆菌是一种革兰氏染色阴性螺旋形的微需氧菌，其感染是诱发人胃粘膜病变的主要因素之一。在世界范围内约有50％人群感染且py肠一。幽门螺杆菌致病因子包括细胞毒素相关基因A(Cytotoxin．associatedgeneA，cagA)，空泡毒素基因A(vacuolatingcytoto

2、xinA，VacA)，cagT，cagE等，其中以cagA为其关键的毒力因子。临床和病理研究有力地证明幽门螺杆菌与慢性胃炎、消化性溃疡以及胃癌等疾病有着因果关联，但是H矽y励订的致病机制尚不明确。小G蛋白RhoA是Rho家族的重要成员之一，在细胞信号转导通路中起着重要作用。它参与了一系列的生物学进程，包括细胞形态改变，迁移，细胞骨架的调节，平滑肌收缩和肿瘤浸润等。在众多肿瘤组织中，RhoA蛋白的高表达与肿瘤的发生和发展密切相关。SHP．2是一种具有两个SH2功能域的酪氨酸蛋白磷酸酶，以往的研究都集中于其对信号转导通路

3、，如Rho家族G口酶，MAPK和Ras等通道的影响，近年的研究发现SHP一2与肿瘤的发生也有一定的关联。本课题的目的是研究幽门螺杆菌对人胃癌细胞SGC．7901中的SHP．2的表达是否有影响，以及幽门螺杆菌对细胞形态，运动及细胞骨架的影响，探讨幽门螺杆菌与消化道疾病之间的相互关系。江苏大学硕士学位论文本研究将Hpy肠一菌株从人胃粘膜组织中分离，固体培养，收获后用超声波方法裂解H∥肠一，提取其生物活性物质；取生长良好的人胃癌细胞SGC一7901，给予无血清培养基饥饿12h后，以H刀如以菌体提取物刺激胃癌细胞SGC．79

4、011h，用逆转录聚合酶链反应(RT．PCR)半定量法测定SHP．2mRNA相对量，对PCR产物进行克隆和测序。通过实验发现H∥肠一菌体提取物刺激胃癌细胞后，与阴性对照相比，细胞中的SHP．2mRNA表达量无明显差异。在与GenBank中序列进行了同源性比较时发现，序列大小为376bp，同源性为93％。本试验还将H矽yfD一超声提取物刺激SGC．7901细胞，直接观察SGC．7901细胞形态的变化；用Bovden迁移槽和划线法分析细胞迁移活动；用phalloidin对细胞内F．actin进行荧光染色，研究H∥fD“对

5、细胞骨架的作用。结果发现，H∥幻一菌体超声提取物刺激人胃癌细胞SGC．7901后，细胞的活动性增强，受刺激后蜂鸟表型细胞数较对照组大大提高，细胞内骨架也较对照组增多，转染野生型RhoA的细胞受H矽y肠一超声提取物刺激后细胞骨架较未转染者增多；而转染了无活性突变型RhoA的细胞受刺激后与未转染者相比无明显变化。以上结果表明，Hpy如rf提取物在转录水平对人胃癌细胞SGC．7901内SHP．2表达无影响；但其可通过增强RhoA活性而引起细胞发生一系列形态学改变，包括迁移性的增强，骨架增多以及细胞发生蜂鸟表型改变等。Il江

6、苏大学硕士学位论文关键词：幽门螺杆菌，SHP．2，SGC一7901，RhoA，蜂鸟表型，迁移，细胞骨架lll江苏大学硕士学位论文ABSTRACTSince1VVarrenandMarshalletalisolated上玉已妇D6口c纪厂j砂勋一(?王∥幻以，Hp)instomachsinusfromgastritisandpepticulcerpatientforthefirsttimein1982，becauseHj吵幻一infectionhasbeencloselyrelatedtodigestiVetractd

7、isease，alotofstudieshaVebeendoneonitspathogenicmechanism．刀叠ZicD6口cfe，-刃，肠订isaspiral，gram-negatiVeandmicroaerophilicbacterium，isoneofthemajorfactorsinducingpathologicalchangesinhumangastricmucosa，andabouthalfofpeopleinthewo订dareinfectedwithit．Cytotoxin—associate

8、dgeneA(ca雩A)isthekeyVirulencefactorofHp，otherVimlencefactorincludeVacA，cagT，cagEetc．PathologicalandclinicalstudieshaVeconVincinglyproVedtheetiologicalroleofHpinthedeVelopmen