幽门螺杆菌caga基因对胃癌细胞影响论文

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1、幽门螺杆菌cagA基因对胃癌细胞影响论文【关键词】幽门螺杆菌；CagA；细胞增殖；细胞凋亡摘要：目的观察幽门螺杆菌（Hp）野生株与cagA基因同源缺失突变株对人胃癌细胞株BGC823的细胞增殖和凋亡的影响，探讨与Hp毒力基因cagA相关的细胞水平的毒性效应。方法将幽门螺杆菌野生株与cagA基因缺失突变株与BGC823细胞共培养，分别在6，12，24和48h观察细胞形态学变化，采用四甲基偶氮噻唑蓝（MTT）比色法检测细胞增殖活性，流式细胞仪检测细胞凋亡情况。结果野生株和突变株Hp攻击BGC823细胞6h，即可引起细胞的形态学变化.freelutantstrainofChineseH.pyl

2、orionthephenotypes,proliferationandapoptosisinhumangastriccancercelllineBGC823invitro,andtodeterminethecytotoxicityofcagA,oneofthevirulencegeneofH.pylori.MethodsBGC823cellsutant,utantstaingroup,respectively.Thecellphenotypeinedbymethylthiazolyltetrazolium(MTT)method.Theinductionofapoptosisinedbyf

3、loetry.ResultsThechangesofcellmorphologymingbirdmorphology(cellelongation)utantstraingroupthanthatofthecontrolgroupandtheonstratedbyfloetry,theapoptoticrateinboththeutantgroupmingbirdphenotype(cellelongation)orphologycharacteristicsspecificrelatedtothecagAgeneaftertreatedayplaythecrucialroleinH.p

4、ylori'sactionsofinhibitingcellularproliferation;ThecagAgenemayhavetheonlylimitedeffectsonthecellularapoptosisinducedbyH.pylori.Keyg／L、多粘菌素B2500U／L、TMP5mg／L、两性霉素5mg／L），37℃、微需氧条件下（10％CO2，5％O2，85％N2）培养，3d后收集细菌，用PBS制成细菌悬液，在分光光度计上测定细菌浓度（1A660=1×108CFU/ml），然后用含10％胎牛血清的无抗生素RPMI-1640培养液调整适当浓度用于攻击细胞。122BG

5、C823细胞培养BGC823细胞的培养基为含10％胎牛血清的无抗生素RPMI-1640培养液，细胞置于37℃含5％CO2的培养箱中常规培养。123BGC823细胞与Hp共培养BGC823细胞于37℃含5％CO2的培养箱中培养，24h后换用含Hp的细菌悬液，置于37℃微需氧环境中共培养；对照组只含10％胎牛血清的无抗生素RPMI-1640培养液；野生株组和突变株组细菌与细胞的比例均为100∶1。124细胞形态学观察BGC823细胞以1×104个/孔接种于24孔板中，分别于细菌与细胞共同培养的6，12，24，48h对细胞形态进行观察。125细胞增殖测定采用MTT法，细胞以5×103/孔密度接

6、种于96孔板上，每组设6个复孔，分别在细菌与细胞共培养的12，24，48h于每孔加入MTT20μl，置37℃、5%CO2培养箱继续培养4h后，弃孔内培养上清液，每孔加入DMSO150μl，室温避光摇床上充分振荡10min，在酶标仪上测定各孔A492nm吸光度(A)值并记录结果。126细胞凋亡测定细胞以5×105/孔的密度接种于6孔板上，置于37℃含5％CO2的培养箱中培养，24h后换用含Hp（5×107/孔）的细菌悬液，置于CO2培养箱中共培养。在细胞与细菌共培养48h后，胰酶消化细胞，1000r/min离心10min,收集细胞,冷PBS洗3遍，以FTTC-AnnexinV/PI双标记后

7、,流式细胞仪检测，该方法能区别凋亡细胞和坏死(PI标记)细胞。2结果21细胞形态学（图1）图1可见，人胃癌细胞BGC823株经野生株和突变株Hp攻击后，均出现明显的形态学变化，并随Hp与细胞共培养时间的延长，细胞形态学变化越明显。对照组细胞贴壁生长良好，轮廓清晰，呈多边形，胞质内颗粒较少。而野生株和突变株Hp攻击细胞6h，即可见细胞周边有较多细菌附着,细胞有脱壁现象，培养液中可见细胞崩解后的残留颗粒或菌体；培养48h后，可见细胞形态