幽门螺杆菌外膜蛋白cagl基因的克隆、表达及其对il8 mrna表达的影响

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1、幽门螺杆菌外膜蛋白cagL基因的克隆、表达及其对IL8mRNA表达的影响作者：黄世腾，邵世和，韩军，黄河，田树伟【摘要】　　目的：克隆表达幽门螺杆菌（Helicobacterpylori,H.pylori）NCTC11637菌株cagL基因，并探讨其对IL8mRNA表达的影响。方法：设计cagL引物，应用PCR扩增目的基因片段，TA克隆后测序分析,用信息学软件分析其物理化学特性，并构建表达载体cagLPET28a(+)转化E.coliBL21(DE3)，IPTG诱导表达,镍亲和层析纯化，SDSPAGE及蛋白质印迹鉴定表达蛋白。纯化蛋白与细胞GES1共培养，提取细胞总RNA，RTP

2、CR检测细胞IL8mRNA表达。结果：测序分析表明cagL编码成熟肽的碱基序列为654bp,编码217个氨基酸，与基因库公布的其他H.pylori菌株的基因序列同源性为96%～98%，氨基酸同源性为97%～99%，软件预测显示有多个明显的具有抗原活性的结构域；表达蛋白的相对分子质量约为32000，蛋白质印迹检测融合蛋白具有良好的抗原活性；重组蛋白作用于GES1细胞后，可诱导细胞因子IL8在mRNA水平上的表达。结论:CagL蛋白可刺激GES1细胞IL8mRNA的表达。【关键词】幽门螺杆菌；原核表达；白细胞介素8　　［Abstract］Objective:Todetecttheinf

3、luenceofthe15CagLproteinfromH.pyloristrainNCTC11637oninterleukin8mRNAexpressing.Methods：Polymerasechainreaction(PCR)wasusedtoamplifythecagLgenefromH.pyloristrainNCTC11637chromosomalDNA.ThenthetargetgenewasanalyzedandinsertedintotheprokaryoticexpressionvectorPET28a(+).Therecombinantplasmidwastransfo

4、rmedintoE.coliBL21(DE3).ThetransformantcolonywasinducedwithIPTGandthefusionproteinwasanalyzedbySDSPAGEandWesternblot.ThepurifiedCagLwascoincubatedwithGES1cells,RTPCRwasperformedtostudythemRNAexpressionlevelofIL8.Results:Therecombinantplasmidwasconstructed.DNAsequenceanalysisshowedthesequenceof

5、cagLencodingmaturepeptidewas654bp.Thehomologyofthestrainsinnucleotideacidwas96%～98%.Theirhomogeneityintheaminoacidswas97%～99%.Thesoftwarepredictedthefusionproteinpossessedgoodantigencity.Itsrelativemolecularmasswasabout32000.Westernblotmethodshowedgoodantigenicityofthefusionprotein.ItcanstimulateGES

6、1cellstoexpressIL8mRNA.Conclusion:TheCagLrecombinantproteincaninduceGES1cellstoexpressIL8mRNA,whichprovidesafoundationforthefurtherstudiesonitsbiologicalfunction.15　　［Keywords］Helicobacterpylori；prokaryoticexpression；interleukin8　　幽门螺杆菌(Helicobacterpylori,H.pylori)的致病机制极其复杂，致使其引发的相关疾病，如胃炎、十二指肠溃

7、疡、胃腺癌和胃黏膜相关性淋巴样组织(MALT)恶性淋巴瘤的分子机制尚不十分清楚。文献报道，其主要毒力因子CagA是通过cag致病岛（pathogenicityisland,cagPAI）编码的Ⅳ型分泌系统（typeⅣsecretionsystem,TFSS）转运至宿主细胞内［1］，从而引起相关疾病的发生，但对于其转运机制以及H.pylori如何影响宿主细胞膜动力学还不清楚。CagL就是由cag致病