《鲍曼不动杆菌外膜蛋白A的克隆表达及纯化》.pdf

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1、转化医学电子杂志(E—JTranslMed)2015，2(5·基础与转化医学·文章编号：2095-6894(2015)05-001-06鲍曼不动杆菌外膜蛋白A的克隆表达及纯化魏常梅，王俊瑞，孙鹏，张军力(内蒙古医科大学，内蒙古呼和浩特010110；内蒙古医科大学附属医院检验科，内蒙古呼和浩特010050；内蒙古医科大学病原生物学实验室，内蒙古呼和浩特010059)CloningexpressionandpurificationofAcine-(OmpA)，构建其原核表达载体pET30a／ompA，所得产物经tobaeterbaumanniioutermembraneprote

2、inPCR方法和测序进行鉴定．之后筛选阳性表达载体，将其转化至大肠杆菌表达宿主菌BL21，最后将表达的蛋白质进行纯A化．结果：重组表达载体pET30a／ompA构建成功，并经PCRWEIChang．Mei，WANGJun—Rui，SUNPeng，ZHANGJun．方法和测序方法进行鉴定；重组蛋白在所构建的原核表达系统中实现了高表达，纯化后得到了高纯度的OmpA蛋白．InnerMongoliaMedicalUniversity，Hohhot010110，China；结论：本次试验通过分子克隆技术，使鲍曼不动杆菌OmpA蛋ClinicalLaboratory，Affiliated

3、HospitalofInnerMongoliaMedi—白在构建的原核表达系统中成功表达，并且获得了高纯度的calUniversity，Hohhot010050，China；Pathologylaboratory，目标蛋白，为进一步研究鲍曼不动杆菌外膜蛋白A的生物学InnerMongoliaMedicalUniversity，Hohhot010059，China活性及抗体的保护作用奠定了基础．【关键词】鲍曼不动杆菌；外膜蛋白A；表达及纯化【Abstract】AIM：Toprovideabasisstudyforthebiologicalac—【中图分类号】R378【文献标识码

4、】AtivityofAcinetobacterbaumanniioutermembraneproteinA(Om—pA)inAcinetobacterbaumanniibypreparingpurifiedOmpAtll0引言molecularcloningtechnology．METHODS：PCRmethodwas鲍曼不动杆菌是一种非发酵糖类、动力阴性、氧usedtoamplifycodedgeneofOmpAofstandardstrainsATCC19606，andconstructtheprokaryoticexpressionvector化酶阴性的革兰氏阴性杆菌，

5、其广泛分布于自然界、pET30a／ompA．TheroductswereverifiedbyPCRmethod．Then医院环境以及人体表面，是引起医院感染的重要致病thepositivelyexpressedvectorwasselectedandWastransformed菌之一¨J．根据国家细菌监测网统计，我国不同地区intoEscherichiacoliexpressionstrain(BL21strain)．Theex—医院中鲍曼不动杆菌检出率逐年增高，已成为临床感pressionproductswerepurifiedfinally．RESULTS：pET30a／

6、om-染疾病中的主要细菌．现如今，鲍曼不动杆菌对于亚pArecombinationexpressionvectorwassuccessfullyconstructed胺培南、美罗培南等碳青霉烯类抗生素持续保持了较andverifiedbyPCRmethod．Thetargetproteinwashighlyex—高的耐药率]．据文献报道，鲍曼不动杆菌外膜蛋pressedinprokaryoticexpressionsystem，andtheidealOmpAof白的表达情况与多种抗生素的抗性具有明显的相关AcinetobacterbaumanniiWasobtained．CO

7、NCLUSION：Inthis性．外膜蛋白(outermembraneprotein，OMP)是细experiment，AcinetobacterbaumanniioutermembraneproteinAgenewassuccessfullyexpressedintheconstructedprokaryoficex—菌肽聚糖外脂质双层镶嵌的特殊蛋白质，它被证实可pressionsystembymolecularcloningtechnologyandthehighly以负责细菌代谢相关物质的运输、参