幽门螺杆菌新毒素tip-α对il-8、tnf-α、il-1β表达的影响

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1、幽门螺杆菌新毒素Tip-α对IL-8、TNF-α、IL-1β表达的影响陈王凯　郝波　张国新施瑞华基金项目：江苏省高校自然科学研究项目（项目批准号：08KJ3320003）作者单位：210029南京医科大学第一附属医院消化科通讯作者：程文芳，chengwenfang@yahoo.com.cn程文芳【摘要】目的研究幽门螺杆菌（H.pylori，HP）毒素Tip-α(肿瘤坏死因子α诱导蛋白)对细胞因子IL-8、TNF-α、IL-1β表达的影响及其意义。方法从HP的26695菌株扩增位于H.pylori0596的Tip-α基因，重组载体转化至大肠杆菌表达并纯化Tip-α蛋白，用We

2、sternblot方法进行鉴定。以不同浓度的Tip-α作用于胃上皮细胞（GES-1），用ELISA方法检测不同时间点GES-1细胞中细胞因子IL-8、TNF-α、IL-1β表达变化。以PDTC(四氢吡咯烷，NF-κB特异性的抑制剂)阻断NF-κB信号通路后，检测Tip-α作用GES-1后IL-8、TNF-α、IL-1β的表达变化。结果用Westernblot检测纯化蛋白，抗Tip-α抗体可与纯化蛋白特异性结合。Tip-α刺激细胞后细胞因子IL-8、TNF-α、IL-1β的表达水平较刺激前明显升高，刺激前后差别具有统计学意义(P<0.05)。PDTC作用后，再给予Tip-α刺

3、激细胞中IL-8、TNF-α、IL-1β的表达水平与无PDTC作用组相比明显下降(P<0.05)。结论Tip-α可使细胞因子IL-8、TNF-α、IL-1β表达明显升高，在HP致炎中起重要作用，这种作用可能通过NF-κB途径。【关键词】幽门螺杆菌；Tip-α；白介素-8；白介素-1β；肿瘤坏死因子-α；核因子-κBTumornecrosisfactor-αinducingproteinofH.pylorieffectsoncytokinesexpressionCHENWang-kai,HAOBo,ZHANGGuoxin,SHIRui-hua，CHENGWen-fang,.D

4、epartmentofGastroenterology,TheFirstHospitalAffiliatedtoNanjingMedicalUniversity,Nanjing210029,CHINACorrespondingauthor：CHENGWen-fang，Email：chengwenfang@yahoo.com.cn【Abstact】objectiveToinvestigatetheeffectsofTip-α(Newtumornecrosisfactor-a-inducingprotein)ontheexpressionofcytokinesanditssig

5、nificance.MethodsTip-αwereamplifiedfromgenomesequenceofHelicobacterpylori(H.pylori)strain26695.TherecombinantplasmidwastransformedintoE.coli.Theexpressionproductwasconfirmedbywesternblotting.BydifferentconcentrationsofTip-αaffecttingGES-1indifferenttimes,thelevelofcytokines（IL-8、TNF-α、IL-1

6、β）weredetectedbyELISA.Thelevelofthemwas　alsodetectedinGES-1afterNF-κBwasinhibitedbyPDTC(PyrrolidineDithioearbamate,thespecialinhibitorofNF-κB).ResultsTip-αantibodyspecificitycombinewithpurifiedproteinsbyWesternblotanalysis.WhenTip-αinterferedthecells,thelevelofcytokineswassignificanthigher

7、thanthatofcontrol(P<0.05)..AftercuttingofftheNF-κBbyPDTC,wefoundthatthelevelofcytokinesweresignificantlowerthanthatofonlyTip-αinterfering(P<0.05).ConclusionTip-αcanpromotetheexpressionofcytokines（IL-8、TNF-α、IL-1β）,itmayplayanimportantroleinthephlogogeniceffect