凝血酶激活的纤溶抑制物研究进展

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1、凝血酶激活的纤溶抑制物研究进展李耀民李臣文（通讯作者）李兆欣（山东省潍坊市中医院急救中心261041）【摘要】TAFI于1989年被发现，其激活状态通过水解纤维蛋白凝块表面的C端赖氨酸发挥抗纤溶作用。TAFIa于37°C时半衰期仅为8到15分钟，虽然目前没有发现内源性抑制物，但TAFIa的活性是可控的。研究发现TAFI对各种静脉、动脉疾患有影响。另外TAFI在炎症过程中发挥作用。高TAFIa水平是血栓性疾病的潜在危险因素。抑制TAFI系统可能为血栓性疾病的预防或溶栓治疗开辟新的途径。【关键词】凝

2、血酶激活的纤溶抑制物（TAFI）【中图分类号】R453【文献标识码】A【文章编号】2095-1752（2014）24-0053-021TAFI的发现及命名1989年在新鲜血清中检测到一种与血浆羧肽酶N（CPN）无关的不稳定的狻肽酶活性，被命名为不稳定的狻肽酶（CPU）。1995年Bajzar等人发现一种由凝血酶激活的能使纤溶减弱的羧肽酶原，并命名为凝血酶激活的纤熔抑制物（TAFI）。氨基酸测序证明proCPU和TAFI为同一物质。2TAFI的作用组织型纤溶酶原激活剂（t-PA）在血凝块表面激活纤

3、溶酶原为纤溶酶从而启动纤溶。纤溶酶部分降解纤维蛋白使其C端赖氨酸残基暴露于纤维蛋白表面。这些赖氨酸残基进一步激活纤溶酶，纤溶酶从而大量牛.成。TAFIa可将部分降解的C端赖氨酸残基移除，使其丧失进一步激活纤溶酶原的作用，从而是t-PA的纤溶作用明显降低。只要TAFIa达到一定的临界浓度，纤溶将被抑制处于初始阶段。持续高于临界值的低水平的TAFI激活远比短时间高水平TAFI激活有效［1］。TAFIa还有多种其他作用底物，缓激肽、活化的补体C3a、C5a都可以被TAFIa火活。可见TAFI在炎症过程

4、中发挥作用。3TAFI的合成及分布Eaton等人首先分离并鉴定TAFI的cDNA。TAFI的编码基因CPB2，定位于第13对染色体（13ql4.ll）,包含11个外显子。共发现19个单独的核苷酸多态现象，6个位于编码区域，其中2个造成了氨基酸置换，+505G/A和+1040C/T分别对应147Ala/Thr（苏氨酸）和325Thr/lle（异亮氨酸）。325位置上的多态性对TAFIa的稳定性和TAFI在免疫检测中的反应性奋重要影响。TAFI主要由肝合成，以酶原形式存在于血液循环中。TAFI由40

5、1个氨基酸组成，含有5个糖基化位点，被糖基化后分子量为56kDa。血小板激活吋也可以释放TAFI。虽然血小板中的TAFI仅占TAFI总量的0.1%,但在血栓形成吋血小板释放TAFI可使其局部浓度升高。由于较小剂量的TAFIa即可影响血凝块溶解，血小板释放的TAFI可能也能影响纤溶。4TAFI的激活凝血酶或纤溶酶可以在92位精氨酸和93位丙氨酸之间裂解TAFI,使其分解为有活性的蛋白酶TAFIa（Ala93-Val401,36kDa）和激活肽（Phel-Arg92,20kDa｝。凝血酶与凝血调节蛋

6、白结合形成的凝血酶复合物（T/TM）可以激活蛋白C和TAFI。一方面可以抑制血凝块过量形成，另一方面也可以保护己经形成的血凝块。5TAFIa的稳定性TAFI激活后具有明显温度依赖性的稳定性，37°C吋半衰期为8分钟，而在22°C吋半衰期可达数小吋。TAFIa的稳定性也与325位点的多态性有关，325位点为异亮氨酸时半衰期可加倍。TAFIa自发的失活在其抗纤溶活性调节中发挥作用，稳定性越高抗纤溶活性越高。TAFIa的失活与其构象改变有关，构象发生改变后其隐藏的裂解位点就会暴露，随后被裂解而失活。6

7、TAFI的抑制因素现己发现邻二氮杂菲等多种非特异性小分子TAFI抑制剂。这些抑制剂会同吋抑制CPN等其他羧肽酶。一些天然的TAFIa抑制剂如马铃薯竣肽酶抑制剂（PTCI）可以竞争性抑制TAFIa活性，而且不会抑制CPN。除了直接抑制TAFIa的活性，也可以通过•一些单克隆抗体和纳米抗体抑制TAFI激活，使TAFIa形成减少而减弱其作用。7TAFI的结构2008年Marx成功阐明人类TAFI的结构。催化域包含8组β折叠和9组α螺旋，构成了典型的α/β水解

8、酶。位于氨基端的激活肽可细分为两部分。Phel-Val76为第一部分，为一个反平行的单片三明治结构，由4组β折叠和2组α螺旋构成。第二部分Glu77-Arg92是连接区域，为不完全的α螺旋结构。Phe296-Trp350是催化域中一个特殊的动态片段，具有较高的活动性，在TAFI未激活时激活肽的35位缬氨酸残基和39位亮氨酸残基与该片段的341位酪氨酸残基相互作用，可稳定该片段。TAFI激活时激活肽被裂解，对动态片段的稳定作用消失，随后TAFIa发生构象变化，其催