选择性cox2抑制剂ns398对前列腺癌pc3细胞增殖与凋亡的影响

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1、选择性COX2抑制剂NS398对前列腺癌PC3细胞增殖与凋亡的影响【摘要】目的观察环氧化酶2(COX2)抑制剂NS398对前列腺癌细胞PC3增殖和凋亡的影响。方法采用四甲基偶氮唑蓝法(MTT法)检测不同浓度和不同时间NS398对PC3细胞增殖的影响；RTPCR法检测不同浓度NS398作用PC3细胞24h后COX2mRNA的表达；酶联免疫测定法(ELISA)检测不同浓度NS398作用PC3细胞24h后PGE2释放水平；流式细胞仪检测不同浓度NS398作用PC3细胞24h后细胞凋亡情况。结果NS398可以抑制PC3细胞的增殖，呈时间和剂量依赖性；RTPCR和ELIS

2、A法检测结果显示，随着NS398浓度增高，PC3细胞COX2mRNA表达和PGE2释放水平呈下调趋势；细胞凋亡检测结果显示100、200μmol/LNS398对PC3细胞具有诱导凋亡的作用。结论NS398可能通过COX2依赖性途径抑制前列腺癌PC3细胞增殖，促进肿瘤细胞凋亡。【关键词】前列腺癌；环氧化酶抑制剂；增殖；凋亡ABSTRACT:ObjectiveToinvestigatetheeffectofcyclooxygenase2inhibitorNS398ontheproliferationandapoptosisofprostatecancercelllinePC3i

3、nvitro.MethodsTheproliferativeinhibitionofPC3cellsethylthiazoltetrazolium(MTT)rapidphotocolorimetricassay;theexpressionofCOX2mRNAinculturedPC3cellsinedbyRTPCR;thereleaselevelsofPGE2easuredbyenzymelinkedimmunosorbentassay(ELISA);PC3cellsculturedindifferentconcentrationsofNS398mediumfor24hark

4、edetry.ResultsAfterthePC3cellsRNAandthereleaselevelsofPGE2ol/LNS398mediumfor24hhadsignificantlyhigherincidenceofapoptosis.ConclusionNS398caninhibitproliferationofhumanprostatecancercelllinePC3andinduceitsapoptosisinvitro,aycontributedtotheCOX2dependentpatha公司)；5%四甲基偶氮唑蓝(MTT溶液，美国Sigma公司)；胰蛋白酶、R

5、MPI1640培养基、小牛血清(美国Gibco公司)；PGE2酶联免疫测定试剂(苏州大学医学院血栓研究所)。1.2方法1.2.1细胞培养PC3细胞在10%灭活小牛血清的RPMI1640培养基中，37℃、5%CO2、饱和湿度的恒温培养箱内培养，细胞增殖覆盖培养瓶底面积90%时，0.25%胰蛋白酶消化收集细胞传代或用于实验。1.2.2NS398对PC3细胞增殖影响的检测制备PC3单细胞悬液，PC3细胞以5×103个/孔接种于96孔培养板中，24h后换含有不同NS398浓度梯度(0、10、50、100、200μmol/L)的含10%血清RPMI1640培养液，分别在加药后24、4

6、8、72、96h行MTT快速比色，酶联免疫检测仪读取每孔的吸光度值(λ=570nm)，按下列公式计算，细胞增殖抑制率=(对照组吸光度值-实验组吸光度值)/对照组吸光度值×100%。1.2.3PC3细胞COX2mRNA表达的检测PC3细胞以5×105个/孔接种于6孔培养板，24h后各取6孔换含有10、100、200μmol/LNS398无血清RPMI1640培养液作为实验组，6孔换含有0.5%二甲基亚砜(DMSO)无血清RPMI1640培养液作为对照组，培养24h后消化、收集细胞。1×106PC3细胞，Trizol法提取细胞总RNA，紫外分光光度计测定纯度，调整RNA浓度至0.

7、5μg/μL待用。逆转录合成cDNA，PCR体系中COX2引物序列：5′TGCTGAAGCCCTATGAAT3′，5′CAGAAGGGCAGGATACAG3′产物114bp；内参βactin引物序列：5′GATGACAAGAAGGTGGTGAAG3′，5′GTCTTACTCCTTGGAGGCCATGT3′，产物246bp。PCR产物在2%琼脂糖上电泳，凝胶图像分析仪扫描记录结果。1.2.4PC3细胞释放PGE2