选择性COX2抑制剂NS398对肝癌细胞增殖和凋亡的影响及对5FU化疗的辅助作用

《选择性COX2抑制剂NS398对肝癌细胞增殖和凋亡的影响及对5FU化疗的辅助作用》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、兰州医学院硕士学位论文选择性COX-2抑制剂NS-398对肝癌细胞增殖和凋亡的影响及对5-FU化疗的辅助作用姓名：张岭漪申请学位级别：硕士专业：内科学（消化系病）指导教师：马力2003.6.1兰州医学院硕士学位论文选择性COX．2抑制剂NS-398对肝癌细胞增殖和凋亡的影响及对5-FU化疗的辅助作用摘要背景：肝癌是人类恶性肿瘤死亡的主要原因之一。迄今为止，肝癌发生发展的确切的分子机制仍不明确。环氧化酶(CoX)是催化花生四烯酸转化为前列腺素和血栓素的合成酶，已经证实它有COX-i和COX-2二种同功酶。COX-i属于结构酶，存在于许多类型的组织细胞中，主要与前列腺素对胃肠道、肾脏

2、等重要器官的细胞保护有关；而COX-2在生理状态下很少表达，但在部分组织细胞中受细胞有丝分裂原、细胞因子和其它刺激因子诱导而呈现高表达状态。COX-2作为前列腺素合成的限速酶，是一种备受关注的、与包括肝癌在内的多种肿瘤的发生发展相关的细胞调节因子。研究发现，肝癌中存在着COX-2的高表达。新近发现的非甾体类抗炎药选择性地抑制COX-2，能够发挥治疗作用而没有因抑制COX-I出现的副作用。研究表明，肝癌细胞中COX-2表达与其细胞分化程度密切相关，提示COX-2异常表达在肝癌发生中起着十分重要兰州医学院硕士学位论文的作用。然而，抑制COX～2所产生的抗肝癌的确切机制并不明确，也未见

3、有关NS一398与5～FU联合使用发挥协同作用的报道。本研究旨在对NS一398抗肝癌作用机制和与5—FU联合使用的可行性进行探讨。目的：研究选择性COX-2抑制剂NS-398对人肝癌细胞HepG2的生长抑制和诱导凋亡作用及Bcl-2、CyclinD，在人肝癌细胞凋亡和细胞周期过程中的调控作用；观察NS一398辅助5—FU的化疗效应。方法：通过体外细胞培养，应用MTT法观察NS-398、5一FU及NS一398+5一FU对人肝癌细胞株HepG2生长抑制作用；通过荧光显微镜、透射电镜、流式细胞仪研究NS-398、5一FU及NS-398+5一FU对HepG。的凋亡诱导作用；应用免疫细胞化

4、学法观察Bcl-2、Cyc!inD，在人肝癌细胞HepG。凋亡过程和细胞周期过程中的表达。结果：NS-7398对肝癌细胞株HepG。有显著的生长抑制作用，抑制程度里剂量、时间依赖关系；5一FU对人肝癌细胞株HepG2也有明显的生长抑制作用。NS-398与5-FU联合应用后抑制№pG2的作用较单一药物应用时为强(pm05,pm01)。NS一398、5哪及Ns一398+5—FU处理HepG。细胞后均可见到典型的纲胞凋亡形态与变化。电镜下，细胞核固缩、染色质凝集成新月型紧靠核膜周兰州医学院硕士学位论文边，核碎裂、染色质片断化等；荧光显微镜下，除NS一398组外均出现核体积缩小、细胞核或

5、细胞质可呈浓染致密的荧光；流式细胞检测表明，NS一398组无Sub—G。峰出现，5-FU组有典型的Sub—G，峰出现，NS一398+5一FU组可检测到Sub-G，峰，且凋亡小峰较单用5一FU升高，凋亡细胞数增加。免疫细胞化学分析显示，NS一398、5一FU及NS-398+5一FU处理后的HepG2细胞，其抗凋亡基因Bcl一2表达较对照组明显下降。与对照组相比，细胞周期蛋白CyclinD，在NS一398及NS-398+5一FU组表达降低，在5一FU组则无明显变化；流式细胞检测表明，与对照组相比，NS-398组有显著的G。期细胞阻滞作用0饱鲫，5-FU组有S期细胞数增多，与对照组和5

6、—FU组相比，NS一398+5一FU组也有显著的G。期细胞阻滞现象◇以鲫l。结论：COX-2选择性抑制剂NS-398对人肝癌HepG2细胞有显著的生长抑制作用；抑制生长的机制为诱导了细胞凋亡并引起G0／GI期细胞阻滞；抗凋亡基因Bcl-2和细胞周期蛋白CyclinDl在NS-398诱导Hep62细胞凋亡和细胞周期停滞中均发挥了重要调控作用；NS-398有增加5一F【l化疗效果的辅助作用。NS-398可以作为肝癌预防和治疗的药物。关键词：肝细胞癌，环氧化酶一2抑制剂，NS-398，凋亡，Bcl-2，CyclinOl兰型墨兰堕塑圭兰竺望兰一EFFECTOFCoX-2SELECTIVE

7、INHIBITORNS-398ONPROLIFERATIONANDAPOPTOSISOFHUMANHEPATOCELLULARCARCINOMAANDONASISTINGAN硼H垤oREFFECACYOF5-FUBACKGROUNDHepatocellularcarcinoma(HCC)istheleadingcauseofmalignantcanerdeathintheworld．However,thecxagtmolecularmechanismofhepatocarcino