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时间:2018-11-05
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1、选择性COX2抑制剂NS398对前列腺癌PC【摘要】目的观察环氧化酶2(COX2)抑制剂NS398对前列腺癌细胞PC3增殖和凋亡的影响。方法采用四甲基偶氮唑蓝法(MTT法)检测不同浓度和不同时间NS398对PC3细胞增殖的影响;RTPCR法检测不同浓度NS398作用PC3细胞24h后COX2mRNA的表达;酶联免疫测定法(ELISA)检测不同浓度NS398作用PC3细胞24h后PGE2释放水平;流式细胞仪检测不同浓度NS398作用PC3细胞24h后细胞凋亡情况。结果NS398可以抑制PC3细胞的增殖,呈时间和剂量依赖性;RTPCR和ELISA法检测结
2、果显示,随着NS398浓度增高,PC3细胞COX2mRNA表达和PGE2释放水平呈下调趋势;细胞凋亡检测结果显示100、200μmol/LNS398对PC3细胞具有诱导凋亡的作用。结论NS398可能通过COX2依赖性途径抑制前列腺癌PC3细胞增殖,促进肿瘤细胞凋亡。【关键词】前列腺癌;环氧化酶抑制剂;增殖;凋亡ABSTRACT:ObjectiveToinvestigatetheeffectofcyclooxygenase2inhibitorNS398ontheproliferationandapoptosisofprostatecancercelllinePC3
3、invitro.MethodsTheproliferativeinhibitionofPC3cellsethylthiazoltetrazolium(MTT)rapidphotocolorimetricassay;theexpressionofCOX2mRNAinculturedPC3cellsinedbyRTPCR;thereleaselevelsofPGE2easuredbyenzymelinkedimmunosorbentassay(ELISA);PC3cellsculturedindifferentconcentrationsofNS398mediumfo
4、r24harkedetry.ResultsAfterthePC3cellsRNAandthereleaselevelsofPGE2ol/LNS398mediumfor24hhadsignificantlyhigherincidenceofapoptosis.ConclusionNS398caninhibitproliferationofhumanprostatecancercelllinePC3andinduceitsapoptosisinvitro,aycontributedtotheCOX2dependentpatha公司);5%四甲基偶氮唑蓝(MTT溶液,美国Si
5、gma公司);胰蛋白酶、RMPI1640培养基、小牛血清(美国Gibco公司);PGE2酶联免疫测定试剂(苏州大学医学院血栓研究所)。1.2方法1.2.1细胞培养PC3细胞在10%灭活小牛血清的RPMI1640培养基中,37℃、5%CO2、饱和湿度的恒温培养箱内培养,细胞增殖覆盖培养瓶底面积90%时,0.25%胰蛋白酶消化收集细胞传代或用于实验。1.2.2NS398对PC3细胞增殖影响的检测制备PC3单细胞悬液,PC3细胞以5×103个/孔接种于96孔培养板中,24h后换含有不同NS398浓度梯度(0、10、50、100、200μmol/L)的含10%血清RPMI
6、1640培养液,分别在加药后24、48、72、96h行MTT快速比色,酶联免疫检测仪读取每孔的吸光度值(λ=570nm),按下列公式计算,细胞增殖抑制率=(对照组吸光度值-实验组吸光度值)/对照组吸光度值×100%。1.2.3PC3细胞COX2mRNA表达的检测PC3细胞以5×105个/孔接种于6孔培养板,24h后各取6孔换含有10、100、200μmol/LNS398无血清RPMI1640培养液作为实验组,6孔换含有0.5%二甲基亚砜(DMSO)无血清RPMI1640培养液作为对照组,培养24h后消化、收集细胞。1×106PC3细胞,Trizol法提取细胞总R
7、NA,紫外分光光度计测定纯度,调整RNA浓度至0.5μg/μL待用。逆转录合成cDNA,PCR体系中COX2引物序列:5′TGCTGAAGCCCTATGAAT3′,5′CAGAAGGGCAGGATACAG3′产物114bp;内参βactin引物序列:5′GATGACAAGAAGGTGGTGAAG3′,5′GTCTTACTCCTTGGAGGCCATGT3′,产物246bp。PCR产物在2%琼脂糖上电泳,凝胶图像分析仪扫描记录结果。1.2.4PC3细胞释放PGE2测定PC3细胞以1×
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