反相高效液相色谱负峰测定法研究以及酮类的测定

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1、反相高效液相色谱负峰测定法研究以及酮类的测定作者：王培郭治安陈海旭王丽琴【摘要】　　研究了反相液相色谱中负峰现象及产生的原理，应用计量置换作用原理解释了样品在色谱柱中的计量置换保留行为；应用负峰法测试了甲基脂肪酮各组分的含量。本研究采用AgilentC18色谱柱(150mm×4.6mm,5μm)，流动相为V（甲醇）∶V(水,含0.01mmol/L磺基水杨酸)=60∶40，紫外检测器(λsig=310nm，λref=275nm)。本方法简便，线性相关系数r均大于0.9993；甲基酮的定量下限为0.041μg；相对标准偏差为0.52%～0.80%。【关键词】反相高效液相色谱；负峰法；计量置

2、换；甲基酮　　AbstractThephenomenonofnegativepeaksultravioletdetection(UV)atography,solutemoleculesinthemobilephaseundergomanysuccessiveadsorptionsanddesorptions.Itetricdisplacement.Thestoichiometricdisplacementretentionbehaviorofsamplesinthecolumnixedketonesthestudy,UVdetectorcanbeusedtodetectthesampl

3、eatographyseparationedonAgilentC18columnethanolmol/Lasmobilephaseand，λref=275nm).ThemethodpleandthecorrelationcoefficientsitofquantitativedetectionethylketonesandthEirrelativestandarddeviationsanceliquidchromatography;Negativepeak;Stoichiometricdisplacement;Methylketones　　　1引言反相液相色谱中负峰测定法是一种间接光

4、度检测方法，广泛应用于离子色谱和毛细管电泳中，检测对象基本是离子型化合物[1～5]，对于其作用机理也有相关解释[3～5]。而由于缺乏合理的理论解释，间接光度反相液相色谱未得到很好的应用。色谱计量置换机理[6]即一个溶质分子被吸附剂吸附的同时，必伴随着一定计量数目的溶剂分子离开溶质分子与吸附剂的界面而返回到溶液中。这个理论很好地解释了间接光度反相液相色谱测定中出现的负峰现象。若应用紫外检测器，样品分子是无紫外吸收或弱紫外吸收的分子，流动相含有紫外吸收分子，则在色谱分离过程中样品分子与固定相上吸附的紫外吸收分子发生置换使其返回到流动相中，相应谱带的紫外吸收分子浓度降低，检测器检测出负峰（即

5、弱吸收峰）信号。因此，负峰法使紫外检测器可应用于无紫外吸收或弱紫外吸收的物质的分析测定。醛酮分子在紫外区有很微弱的吸收，用紫外检测器一般很难直接测定。通常，醛酮的测定需利用氨化还原反应在其还原端接上有紫外吸收的基团，例如2,4二硝基苯肼衍生测定法[7,8]。若能借鉴色谱中的计量置换机理，采用间接光度技术直接测定醛酮，则可消除衍生化操作带来的麻烦和误差。　　3.4本底试剂浓度的选择将本底物质加入流动相中，会使得基线噪音增大，所以选择本底试剂的浓度应尽可能低；但如果其浓度太低，将降低检测的灵敏度。本实验分别配制本底试剂浓度0.005，0.01，0.02和0.05mmol/L的流动相，平衡

6、仪器至基线平直，进行实验。由图3所示，基线噪音随本底物质浓度变化较大，且当本底物质浓度为0.01mmol/L时，噪音最小，最小检测量最低。所以，确定流动相中所加的磺基水杨酸的浓度为0.01mmol/L。　　3.5甲基酮系列分离准确量取丙酮、丁酮、甲基异丙基甲酮和甲基异丁基甲酮各100μL于10mL容量瓶中，用本底试剂浓度为0.01mmol/L的流动相作为溶剂加至刻度，摇匀。取10μL此甲基酮混合溶液进样进行色谱分离（图4），分离结果良好，以上各物质的分离度均大于1.5，峰形良好。　　3.6线性关系、精密度和检出限峰面积和进样量成正比，是色谱定量分析的依据。本方法是根据色谱过程样品组分对

7、本底试剂的置换作用建立的，测定的是负峰，为考察负峰面积与进样量间的关系，在本文选定的色谱条件下，取上述甲基酮溶液分别进样2，4，6，8和10μL。将所测得的峰面积与对应酮的绝对量进行线性回归，丙酮、丁酮、甲基异丙基甲酮、甲基异丁基甲酮的峰面积A与其绝对进样量x的工作曲线分别为：A=226.19x－123.62，A=230.24x－98.855，A=218.65x－110.01，A=179.63x－45.128，线性相关系数r分别为0.9993，