反相高效液相色谱负峰测定法研究以及酮类的测定论文

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1、反相高效液相色谱负峰测定法研究以及酮类的测定论文王培郭治安陈海旭王丽琴【摘要】研究了反相液相色谱中负峰现象及产生的原理，应用计量置换作用原理解释了样品在色谱柱中的计量置换保留行为；应用负峰法测试了甲基脂肪酮各组分的含量。本研究采用AgilentC18色谱柱(150mm×4.6mm,5μm)，流动相为V（甲醇）∶V(水,含0.01mmol/L磺基水杨酸)=60∶40，紫外检测器(λsig=310nm，λref=275nm)。本方法简便，线性相关系数r均大于0.9993；甲基酮的定量下限为0.041μg；相对标准偏差为0.52%～

2、0.80%。【关键词】反相高效液相色谱；负峰法；计量置换；甲基酮AbstractThephenomenonofnegativepeaksultravioletdetection(UV)atography,solutemoleculesinthemobilephaseundergomanysuccessiveadsorptionsanddesorptions.Itetricdisplacement.Thestoichiometricdisplacementretentionbehaviorofsamplesinthecolumn

3、ixedketonesthestudy,UVdetectorcanbeusedtodetectthesampleatographyseparationedonAgilentC18columnethanolmol/Lasmobilephaseand，λref=275nm).Themethodpleandthecorrelationcoefficientsitofquantitativedetectionethylketonesandtheirrelativestandarddeviationsanceliquidchromat

4、ography;Negativepeak;Stoichiometricdisplacement;Methylketones1引言反相液相色谱中负峰测定法是一种间接光度检测方法，广泛应用于离子色谱和毛细管电泳中.freelstation化学工作站、AgilentC18色谱柱(150mm×4.6mm,5μm)。甲醇（色谱纯，FisherScientific公司）；丙酮（天津市富于精细化工有限公司）；丁酮（天津化学试剂六厂）；甲基异丙基甲酮（上海试剂一厂）；甲基异丁基甲酮、对苯二酚（西安化学试剂厂）；水杨酸（新中化学厂）；磺基水杨酸

5、（广州化学试剂厂）；N,N二甲基乙酰胺（成都市联合化工试剂研究所），上述试剂均为分析纯，实验用水为二次蒸馏水。2.2实验方法用含确定量本底试剂的流动相平衡仪器至基线平直，在选定色谱条件下，对样品进行分析。３结果与讨论3.1流动相的选择实验中采用二元流动相，向流动相中加入适量的本底试剂，在流动相中甲醇与本底试剂水溶液的体积比分别为70∶30，60∶40，50∶50，40∶60和30∶70，对甲基酮系列样品混合溶液进行测定。实验表明，当V(甲醇)∶V(本底试剂水溶液)=60∶40时，各组分能达到很好地分离，而且分析时间短。因此本

6、实验采用V(甲醇)∶V(本底试剂水溶液)=60∶40为流动相进行样品测定。3.2本底试剂的选择基于本底试剂的化学性质和极性，本实验考察了对苯二酚、水杨酸、磺基水杨酸、N,N二甲基甲酰胺作为本底试剂时，甲基酮的检出限和仪器平衡时间。磺基水杨酸的极性较强，平衡时间短，而且检出限低，结果如表1所示。本实验最终以磺基水杨酸为本底试剂。表1本底试剂与平衡时间和最低检测量的关系（略）3．3负峰产生机理及检测波长的选择实验向流动相中加入磺基水杨酸作为强紫外吸收的本底试剂，用这种流动相平衡仪器至基线平直。因为待分析样品甲基脂肪酮是弱紫外吸收

7、物质，所以当样品进样后，甲基酮分子把原来吸附在固定相上的部分流动相分子（包括甲醇、水和加入的本底试剂分子）置换出来，使得固定相上对应甲基酮分子谱带的磺基水杨酸浓度低于其它分子谱带。由于此方法检测的吸光度为磺基水杨酸浓度变化的净吸光度，因此流出色谱柱经过检测器时测得比基线小的吸光度，紫外检测器检测出负峰信号。本实验以甲基酮的吸收波长275nm作为参比波长，改变检测波长对样品进行测定。实验发现，基线噪音和信噪比随检测波长而变化，噪音小，信噪比大，检测灵敏度高。如图1和图2所示，检测波长高于260nm噪音较小且无明显变化；310nm

8、时信噪比最大。实验选择的本底试剂为磺基水杨酸，经测定其最大吸收波长为296nm，而样品的最大吸收波长在275nm附近。如果选择检测波长为296nm，样品信号峰最大，但噪音略大，则信噪比较小。由于实验测定的是本底试剂吸光度的减少值，磺基水杨酸最大吸收波长296nm靠近样品的最大