影响反相高效液相色谱分离的因素.doc

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1、实验二影响反相高效液相色谱分离的因素一、实验目的1.了解高效液相色谱仪器结构；2.熟悉溶质结构、溶剂组成和固定相对溶质保留值的影响；3.了解影响反相高效液相色谱分离的因素。二、实验原理1.反相色谱保留机制：疏溶剂理论溶质的疏水性、流动相的极性（表面张力）和固定相的烷基链长影响溶质的保留。2.影响溶质分离的因素n：柱长、柱效α：流动相组成与性质、固定相性质、柱温等k：流动相组成与性质、固定相性质、柱温等三、实验条件色谱柱：C18（150mm×4.6mm；250mm×4.6mm）流动相：甲醇-水（100，95/5，90/10）；流速：1.0（0.8，0.6，）mL·min-1检测：U

2、V254nm样品：苯、萘、蒽四、操作步骤1.流动相组成对分离的影响在C18（150mm×4.6mm）和1.0mL·min-1流速下，依次更换流动相，在每个体系中，均注入5μL苯-甲苯-萘混合样品，记录色谱图，计算对应的k、α和R。甲醇-水kαRk1k2k3α2,1α3,2R2,1R3,210095/590/102.流动相流速对分离的影响在C18（150mm×4.6mm）和甲醇-水（90/10）下，依次更换流动相流速，在每个体系中，均注入5μL苯-甲苯-萘混合样品，记录色谱图，计算对应的n、k和R。流速（mL·min-1）nkRn1n2n3k1k2k3R2,1R3,21.00.80

3、.63.柱长对分离的影响更换色谱柱，在甲醇-水（90/10，v=1.0mL·min-1）体系中，注入5μL苯-甲苯-萘混合样品，记录色谱图，计算对应的k、α和R。柱长nkRn1n2n3k1k2k3R2,1R3,215cm25cm五、数据处理1.根据操作步骤1，绘制lgk～CH3OH％曲线。2.根据操作步骤1、2和3，说明流动相组成、流速和柱长对k和R的影响。六、思考题1.根据本实验的主要结论，指出下列各组物质在反相色谱中的洗脱顺序。（1）苯、苯酚和萘；（2）苯酚、邻甲酚和2,4-二甲酚；（3）正丁醇、仲丁醇和叔丁醇2.在反相柱上欲分离三个相邻的组分，初试未达到完全分离。如何实现完

4、全分离？