影响测定反相高效液相色谱流动相pH值的因素

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1、影响测定反相高效液相色谱流动相pH值的因素宋永康郭嘉潘葳（福建省农业科学院中心实验室福州350003）E-mail:songlibby@sohu.com摘要以采用反相高效液相色谱法测定九种有机酸为例，探讨了流动相pH值对分析结果的影响。实验结果表明pH=2.40时，九种有机酸得到有效分离，且峰形理想，而不同pH值对分析结果影响很大，不仅会大大改变各有机酸的保留值，甚至会导致无法将各有机酸分离。本文分析了影响测定流动相pH值的因素。关键词反相高效液相色谱；pH值；酸度计中图分类号O657.7TheFactorsofAffectingDeterminingpHValueofRP-HPLCMo

2、bilePhaseSongYongkang,GuoJia,PanWei(CentralLaboratory,FujianAcademyofAgriculturalSciences,Fuzhou350003,China)AbstractThisarticletakestheexperimentofdetermingninekindsoforganicacidsbyRP-HPLCasanexampletodiscusstherefluenceofthepHvalueofmobilephaseontheanalysisresult.Theresultshowsthatninekindsofor

3、ganicacidscanbeseparatedeffectivelyandtheshapeofpeakisidealwhenpH=2.40,whiledifferentkindsofpHvalueofmobilephasehavegreatinfluenceonanalysisresult.Theynotonlychangetheretentiontimesoftheorganicacidsbutalsoresultinfailingtoseparatetheorganicacids.Therefore,theadjustmentofthepHvalueofRP-HPLCmobilep

4、haseisvitalinanalysis.ThisarticleanalysesthefactorsthatinfluencedeterminingpHvalueofmobilephase,whichcanhelpusimproveouraccuracyinpracticalwork.KeywordsHighperformanceliquidchromatography;pHvalue;acidimeter1引言仪器：PHS-3C数字式酸度计,Waters2695型高效液相色谱仪，Waters2996二极管阵列检测器，Empower应用反相高效液相色谱(RP-HPLC)进行分析测定色谱

5、工作站，超声波清洗器，XW-80A旋涡混合器，微时，常常采用离子抑制法即向含水流动相中加入酸、量可调移液器。碱或缓冲溶液等改性剂，以使流动相的pH值控制一2.2试剂定数值，抑制溶质的离子化，减少谱带拖尾、改善峰磷酸、磷酸二氢钾、有机酸标准品均为分析纯。形，以提高分离的选择性[1]。例如在分析有机弱酸时，0.04moL/LKH2PO4-H3PO4缓冲溶液:称取分析纯磷酸常向流动相中加入磷酸(或乙酸、三氯乙酸、1%的甲二氢钾5.44g，用水溶解并定容至1000mL，用磷酸调至酸、硫酸)，就可抑制溶质的离子化，获对称的色谱峰。pH2.4。然后用0.45μm水相滤膜过滤，再经超声波脱对于弱碱性样

6、品，向流动相中加入1%的三乙胺，也气后用作流动相。可达到相同的效果[2~6]。虽然RPC方法建立时最好选用九种有机酸标准溶液的配制：分别准确地称取草pH微小改变不影响分离的流动相，但pH值的较大变酸300mg，酒石酸700mg，丙酮酸20mg，苹果酸1g，化往往会对分析结果产生很大影响，因此流动相pH值柠檬酸2g，琥珀酸6g，富马酸30mg，乳酸5g，乙酸的调节是分析过程中至关重要的一个环节，本文以反5g，置于100mL棕色容量瓶中，用流动相溶液溶解并相高效液相色谱法测定九种有机酸为例考察了不同流定容至刻度。上述溶液经不同浓度稀释后，上机并绘动相pH值对分析结果的影响，指出准确调节流动相

7、制各种有机酸的标准曲线。溶液用前经0.45μm样品pH值的关键所在，有助于提高分析结果的准确性。过滤器过滤.配制试剂所用的水均为二次蒸馏水。2.3　色谱分析条件2　实验部分色谱柱：μBondapakTMC183.9mm(i.d.)×300mm,10μm(Waters)；2.1　仪器流　速：0.8mL/min；收稿日期：2004-12作者简介：宋永康，男，1963年生，现为福建农业科学院实验师。现代科学仪器2005195柱　温：30℃