反相高效液相色谱中流动相选择与优化的研究进展_

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1、·1190·现代药物与临床Drugs&Clinic第29卷第10期2014年10月反相高效液相色谱中流动相选择与优化的研究进展1222*全红娜，金松子，雷勇胜，蒋庆峰1.天津中医药大学，天津3001932.天津药物研究院分析测试中心，天津300193摘要：反相高效液相色谱（RP-HPLC）中的流动相对组分具有很强的亲和力，并且与固定相共同竞争组分，流动相的种类及配比直接影响到组分的分离。因此，正确的选择流动相，确定最佳的色谱分离条件，可以实现更理想的分离。结合日常实验经验和相关文献，综述了在RP-HPLC中，如何快速地进行流动相的选择

2、与优化。关键词：反相高效液相色谱法；流动相；保留因子；分离度中图分类号：R927文献标志码：A文章编号：1674-5515(2014)10-1190-05DOI:10.7501/j.issn.1674-5515.2014.10.027ResearchprogressonselectionandoptimizationofmobilephaseinRP-HPLC1222QUANHong-na,JINSong-zi,LEIYong-sheng,JIANGQing-feng1.TianjinUniversityofTraditionalCh

3、ineseMedicine,Tianjin300193,China2.CenterforInstrumentationAnalysis,TianjinInstituteofPharmaceuticalResearch,Tianjin300193,ChinaAbstract:Themobilephaseofreversedphasehighperformanceliquidchromatography(RP-HPLC)hasastrongaffinityforthecomponentsandcompetesforthecomponent

4、swiththestationaryphase.Thespeciesandproportionofthemobilephasedirectlyaffecttheseparationofcomponents.Therefore,correctlychoosingthemobilephaseanddeterminingthebestchromatographicconditionscouldachievebetterseparation.Combiningdailyexperienceswithrelatedliteratures,the

5、selectionandoptimizationofmobilephaseinRP-HPLChasbeendiscussed.Keywords:RP-HPLC;mobilephase;retentionfactor;resolution在色谱方法开发过程中，高柱效、高分离度是且其保留行为对有机溶剂比例的微量变化非常敏[3]一贯追求的目标，而色谱柱和流动相的选择特别地感，等度洗脱时分离结果的重现性差，白泉等就[1]被关注。流动相是影响高效液相色谱（HPLC）性分别对多肽32、21设计了5、6种线性梯度洗脱方[2]能的重要因素，其性质包括

6、有机溶剂的种类、配式进行流动相优化，最终各自优化出一种线性梯度比和pH值等，对保留时间、峰形和分离度都有影方式，分离、纯化和制备出高纯度的两种多肽。样响，这些直接对实验结果产生不可忽视的作用，因品的相对分子质量对初始条件的选择是有影响的，此正确的选择流动相是至关重要的。本文探讨了反对于相对分子质量大的样品，如多肽、蛋白质和低[4]相高效液相色谱（RP-HPLC）中如何正确快速地选聚物等生物大分子，梯度洗脱是最好的选择。对择流动相，并且优化最佳分离条件。于低相对分子质量的样品，需要通过分析样品性质，1分析样品的组成及性质如溶解性、分子极

7、性及化合物结构、特殊官能团等，在色谱方法建立之初，对样品的化学组成和理选择适宜的流动相及分离模式。化性质要有一定的了解，才能确定与选择出最佳的1.2样品的溶解度初始分离模式。了解样品在有机溶剂中的溶解度，根据“相似1.1样品的相对分子质量相容”原理，初步判断样品是极性还是非极性化合考虑到多肽的相对分子质量大和组成复杂，并物。若样品溶解于己烷、庚烷等非极性溶剂时，即收稿日期：2014-06-25作者简介：全红娜（1987—），女，硕士在读，研究方向是药物分析。Tel:(022)23006881E-mail:qhn2007452083@1

8、63.com*通信作者蒋庆峰Tel:(022)23006881E-mail:jiangqf@tjipr.com现代药物与临床Drugs&Clinic第29卷第10期2014年10月·1191·为非极性样品，可以考虑使用正