反相高效液相色谱负峰测定法研究以及酮类的测定.pdf

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1、第38卷分析化学(FENXIHUAXUE)研究简报第6期2010年6月ChineseJournalofAnalyticalChemistry869～872DOI：10．3724／SP．J．1096．2010．00869反相高效液相色谱负峰测定法研究以及酮类的测定王培郭治安陈海旭王丽琴(西北大学合成与天然功能分子化学教育部重点实验室，文化遗产研究与保护技术教育部重点实验室。，西安710069)摘要研究了反相液相色谱中负峰现象及产生的原理，应用计量置换作用原理解释了样品在色谱柱中的计量置换保留行为；应用负峰法测试了甲基脂肪酮各组分的含量。本研究采用Agil

2、entC色谱柱(150mm×4．6trim，5m)，流动相为(甲醇)：(水，含0．01mmol／L磺基水杨酸)=60：40，紫外检测器(A=310hill，A=275IlIl1)。本方法简便，线性相关系数r均大于0．9993；甲基酮的定量下限为0．041g；相对标准偏差为0．52％～0．80％。关键词反相高效液相色谱；负峰法；计量置换；甲基酮1引言反相液相色谱中负峰测定法是一种间接光度检测方法，广泛应用于离子色谱和毛细管电泳中，检测对象基本是离子型化合物，对于其作用机理也有相关解释～。而由于缺乏合理的理论解释，间接光度反相液相色谱未得到很好的应用。色谱

3、计量置换机理即一个溶质分子被吸附剂吸附的同时，必伴随着一定计量数目的溶剂分子离开溶质分子与吸附剂的界面而返回到溶液中。这个理论很好地解释了间接光度反相液相色谱测定中现的负峰现象。若应用紫外检测器，样品分子是无紫外吸收或弱紫外吸收的分子，流动相含有紫外吸收分子，则在色谱分离过程中样品分子与固定相上吸附的紫外吸收分子发生置换使其返回到流动相中，相应谱带的紫外吸收分子浓度降低，检测器检测出负峰(即弱吸收峰)信号。因此，负峰法使紫外检测器可应用于无紫外吸收或弱紫外吸收的物质的分析测定。醛酮分子在紫外区有很微弱的吸收，用紫外检测器一般很难直接测定。通常，醛酮的测

4、定需利用氨化还原反应在其还原端接上有紫外吸收的基团，例如2，4一二硝基苯肼衍生测定法’。若能借鉴色谱中的计量置换机理，采用间接光度技术直接测定醛酮，则可消除衍生化操作带来的麻烦和误差。文献[9]应用负峰测定法测定乙酸酯，文献[5]报道了间接光度色谱法，但用计量置换机理解释反相液相色谱溶质溶剂作用关系，及负峰法测定酮类物质尚未见报道。本实验在流动相中加入吸光物质作为本底试剂，用负峰法测定甲基脂肪酮类化合物，系统研究了色谱分析条件。本实验用计量置换作用机理解释了反相液相色谱测定中出现的负峰现象。研究表明，在液相色谱分析时紫外检测器也可用于无紫外吸收物质的测

5、定。2实验部分2．1仪器与试剂HP1100液相色谱仪(美国惠普公司)，配DAD二极管阵列检测器、HPChemstation化学工作站、AgilentCl8色谱柱(150mm×4．6him，5m)。甲醇(色谱纯，FisherScientific公司)；丙酮(天津市富于精细化T有限公司)；丁酮(天津化学试剂六厂)；甲基异丙基甲酮(上海试剂一厂)；甲基异丁基甲酮、对苯二酚(西安化学试剂厂)；水杨酸(新中化学厂)；磺基水杨酸(广州化学试剂厂)；N，N一二甲基乙酰胺(成都市联合化工试剂研究所)，上述试剂均为分析纯，实验用水为二次蒸馏水。2009—10-27收稿：

6、2010-01一】5接受本文系西北大学文化遗产研究与保护技术教育部重点实验室开放课题基金(No．KB09033)资助E—mail：guozhianzhao@126．coin870分析化学第38卷2．2实验方法用含确定量本底试剂的流动相平衡仪器至基线平直，在选定色谱条件下，对样品进行分析。3结果与讨论3．1流动相的选择实验中采用二元流动相，向流动相中加人适量的本底试剂，在流动相中甲醇与本底试剂水溶液的体积比分别为70：30，60：40，50：50，40：60和30：70，对甲基酮系列样品混合溶液进行测定。实验表明，当(甲醇)：V(本底试剂水溶液)=60：

7、40时，各组分能达到很好地分离，而且分析时间短。因此本实验采用甲醇)：(本底试剂水溶液)=60：40为流动相进行样品测定。3．2本底试剂的选择基于本底试剂的化学性质和极性，本实验考察了对苯二酚、水杨酸、磺基水杨酸、Ⅳ，Ⅳ一二甲基甲酰胺作为本底试剂时，甲基酮的检出限和仪器平衡时间。磺基水杨酸的极性较强，平衡时间短，而且检出限低，结果如表1所示。本实验最终以磺基水杨酸为本底试剂。表l本底试剂与平衡时间和最低检测量的关系Table1Dependenceofbalancetimeandminimumdetectablequantityonbackgroundr

8、eagent流动相(Mobilephase)：甲醇(Methano1)一水(Water)(含0