桃儿七提取物对人乳腺癌mcf

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1、桃儿七提取物对人乳腺癌MCF【关键词】乳腺癌EffectsofTaoerqiextractonproliferationandapoptosisofhumanbreastcarcinomacelllineMCF7　　【Abstract】AIM:ToinvestigatetheeffectsandrelatedmechanismofTaoerqiontheproliferationinhibitionandonsetofapoptosisinbreastcarcinomacelllineMCF7.METHODS:Antiproliferativeeffectof

2、TaoerqiextractagainstMCF7orphologicchangesofMCF7icroscope,electronmicroscopeandHEstaining,andcellapoptosispercentageandcellcyclephasedistributionofMCF7easuredbyfloetricassay.TheexpressionsofproliferationandapoptosisassociatedprotEinsinedbyimmunocytochemicalmethod.RESULTS:Atimedepend

3、entanddosedependentproliferationinhibitiononstratedinTaoerqiextract.CF7;apoptosis　　【摘要】目的:研究桃儿七对人乳腺癌MCF7细胞增殖抑制和促进凋亡的作用,探讨其抗癌作用的机制.方法:应用MTT法检测桃儿七提取物对人乳腺癌MCF7细胞的生长抑制作用，倒置显微镜、HE染色及电镜观察细胞形态学改变，FCM分析细胞周期及凋亡率，免疫细胞化学法检测细胞增殖凋亡调控相关蛋白的表达.结果:桃儿七提取物可明显抑制MCF7细胞的增殖，1，2，3mg/L桃儿七作用72h后，细胞生长抑制率分别为43

4、.0%，54.9%，78.5%，抑制作用呈时间及浓度依赖性.形态学观察到用药后凋亡细胞典型的形态学特征，伴有多核细胞形成.FCM分析发现桃儿七阻断MCF7细胞生长于细胞周期的G2/M期，凋亡诱导作用呈时间及浓度依赖性.免疫细胞化学结果显示，2mg/L桃儿七作用48h后，PA，Bcl2蛋白表达分别由154.78±0.16，85.56±0.09降至78.46±0.15，40.43±0.07，P<0.01；而p21yc蛋白由92.32±0.12，114.48±0.14增至125.54±0.09，156.52±0.08，P<0.01.结论:桃儿七提取物对人

5、乳腺癌MCF7细胞的生长有明显的呈时间及浓度依赖性的抑制作用,G2/M期阻滞并诱导凋亡.该作用与p21yc表达诱导乳腺癌细胞凋亡.　　【关键词】桃儿七;乳腺癌;人乳腺癌细胞系MCF7;凋亡　　0引言　　藏药桃儿七又名小叶莲，藏药音译奥色塞，习用果实.宗玉英等［1］发现桃儿七果实900mL/L乙醇提取物对肿瘤细胞抑制率为75%,目前对于其抗肿瘤作用机制仍不很清楚.我们对桃儿七根900mL/L乙醇提取物抑制乳腺癌细胞增殖及其诱导凋亡的作用机制进行研究如下.　　1材料和方法　　1.1材料　　乳癌细胞MCF7由第四军医大学分子生物学室惠赠.小牛血清，RPMI1640培

6、养基（Gibco公司）;噻唑蓝（MTT，上海生工生物制品公司）;二甲基亚砜（DMSO）;p21yc，Bcl2，PA鼠抗mAb，SABC及DAB试剂盒（博士德公司）.酶标仪（奥地利Tecan）;相差倒置显微镜（OlympusCK4032RPC）;流式细胞仪（美国CoulterEliteEsp型）;投射电镜（JEM2000EX日本）.取桃儿七根粗粉100g，以石油醚（30~60℃）浸提至无色，药渣再以900mL/L乙醇浸提至无色，乙醇回收溶剂，减压蒸馏获得浸膏，真空低温干燥，制得样品.样品先以少量DMSO溶解，然后用双重蒸馏水稀释配制为20mg/mL的原液，用0.

7、22μm孔径滤膜过滤除菌后-20℃避光保存，临用前再以RPMI1640完全培养基稀释配成不同药物浓度，DMSO在溶液中最大浓度小于0.05%.　　1.2方法　　1.2.1细胞生长状态取对数生长期细胞常规消化接种于96孔培养板（3×103个/孔），每孔200μL，培养24h后弃去培养液，随机分为5组(每组n=8)，实验组加入含不同浓度桃儿七根乙醇提取物的RPMI1640完全培养基200μL，终浓度为（1，2，3mg/L）；阴性对照组加等量RPMI1640培养液；阳性对照组为顺铂（PDD）3mg/L.分别于加药后24，48和72h加入MTT(5g/L)20μL继续

8、培养4h，弃培养液，每孔加150μLD