白藜芦醇对人乳腺癌mcf

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1、白藜芦醇对人乳腺癌MCF作者：黄芳，吴小南，陈洁，汪家梨【摘要】目的研究白藜芦醇(Res)逆转人乳腺癌MCF-7/阿霉素(ADM)细胞多药耐药(MDR)的作用及初步机制。方法采用MTT法测定不同浓度Res对MCF-7/ADM细胞的抑制作用、应用金氏公式判断Res和ADM联合效应;同时采用荧光分光光度法对不同浓度Res作用下MCF-7/ADM细胞内的ADM积量进行测定。结果Res能提高MCF-7/ADM细胞对ADM的敏感性，ADM联合4μmol/LRes时逆转倍数为1.950,8μmol/L为2.178

2、,12μmol/L为2.355;Res可提高ADM在MCF-7/ADM细胞内的蓄积，耐药细胞MCF-7/ADM内ADM的浓度明显升高(与对照组比较，P<0.05)，且细胞内ADM浓度均随细胞外ADM浓度升高而升高。结论Res对ADM抗人乳腺癌MCF-7/ADM细胞具有增敏作用;Res能够部分逆转MDR，其逆转机制与增加ADM药物浓度有关。【关键词】藜芦生物碱类;表柔比星;乳腺肿瘤;肿瘤细胞，培养的;抗药性，肿瘤;抗药性，多药笔者先前的研究表明，白藜芦醇(Resveratrol,Res)联合阿霉素

3、(ADM)对人乳腺癌耐阿霉素细胞(MCF-7/ADM)具有较强的抑制作用，且Res单用或联合ADM对正常肝细胞基本无毒害作用[1]。笔者继续研究Res单用或联合ADM对MCF-7/ADM细胞的增殖抑制效应，以探讨Res对耐药性是否具有逆转作用。　　1材料与方法　　1.1材料Res(纯度>99%)、二甲基亚砜(DMSO)、甲基偶氮唑蓝(MTT)均购自美国Sigma公司，RPMI-1640培养液(美国Gibco公司);盐酸阿霉素(浙江海正药业股份有限公司，批号H33021980)。人乳腺癌敏感株细胞

4、(MCF-7/S)和MCF-7/ADM细胞购自南京凯基生物发展有限公司。MCF-7/ADM另加1.0μg/mLADM以维持其耐药性。　　1.2方法　　1.2.1MTT法测MCF-7/ADM细胞的耐药性将对数生长期的MCF-7/S和MCF-7/ADM细胞消化后配成2×104mL-1细胞悬液，接种于96孔板，培养24h后，加入ADM使其终浓度分别为0.01，0.1，1.0，10和100μmol/L，并设置调零孔(无细胞孔)、溶剂组(0.1%DMSO)、空白对照组。培养48h后，加含0.5mg/mLMTT2

5、00μL，培养4h后在酶标仪上测定波长570nm的OD值。根据公式求出相应的细胞生长抑制率：　　细胞生长抑制率=[1-(实验孔OD值/空白对照组OD值)]×100%　　再根据ADM抑制MCF-7/S，MCF-7/ADM细胞IC50值求耐药倍数：　　耐药倍数=IC50(MCF-7/ADM)/IC50(MCF-7/S)　　1.2.2Res对MCF-7/S和MCF-7/ADM细胞的抑制作用将Res加入MCF-7/S、MCF-7/ADM单细胞悬液中，使Res的终浓度分别为4，8，12和16μmol/L，并设置

6、调零孔、空白对照组、溶剂组(0.1%DMSO)。48h后行MTT实验。计算细胞生长抑制率。　　1.2.3Res联合ADM对MCF-7/ADM细胞的抑瘤增效和逆转作用MCF-7/S、MCF-7/ADM细胞分别加入不同浓度的ADM和Res，使ADM的终浓度分别为2，4，6，8和10μmol/L，Res的终浓度分别为4，8和12μmol/L，并设置调零孔和空白对照组，培养48h后行MTT实验。参照　　2结果　　2.1MCF-7/ADM细胞耐药性的确定ADM对MCF-7/ADM细胞IC50值为21.38μmo

7、l/L;MCF-7/ADM细胞的耐药倍数为54.82倍(表1)。表1ADM对MCF-7/S细胞和MCF-7/ADM细胞的影响　　]2.2不同浓度Res对MCF-7/S细胞和MCF-7/ADM细胞的抑制Res对MCF-7/ADM细胞IC10值为11.39μmol/L，Res在两种细胞之间无耐药性(1.35倍，表2)。　　2.3Res联合ADM对MCF-7/ADM细胞的抑瘤增效和逆转作用对照组的OD值为(1.122±0.011)。经比较，Res与ADM在体外均有相加或增强作用，绝大多数联合用药组的Q>

8、;1.15，表明二者的作用主要表现为协同作用;其逆转倍数随着白藜芦醇浓度的增高而增加(ADM联合4μmol/LRes时逆转倍数为1.950，8μmol/L为2.178，12μmol/L为2.355，表3)。　　2.4荧光分光光度法检测ADM的标准曲线方程为:　　Y=119.316+276.394X，R2=0.957　表2Res对MCF-7/S细胞和MCF-7/ADM细胞的影响　n=4.Res:白藜芦醇;MCF-7/S：人乳腺癌敏感细胞;MCF-7/ADM