针灸血清”对乳腺癌mcf论文

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1、针灸血清”对乳腺癌MCF论文李岩郭刚李彬史秀芳【摘要】目的：观察针灸对乳腺癌细胞凋亡及细胞周期的影响。方法：针灸刺激雌性CF7细胞混合培养，分为电针组、艾灸组和对照组。MTT法检测细胞生长情况，72h后流式细胞技术检测细胞凋亡率及Fas表达率。结果：MCF7细胞Fas表达率明显增高，72h达57.70%；MCF7细胞生长受到明显抑制，12h、24h、72h抑制率分别达17.55%、24.71%和31.85%；作用72h后的细胞凋亡率分别为1.07%、8.72%、10.18%,与艾灸组相近，均明显高于对照组（P＜0.05）。

2、结论：“针灸血清”作用于MCF7细胞可能通过增加Fas的表达率来诱导细胞凋亡。【关键词】针刺灸法乳腺肿瘤细胞凋亡细胞周期TheeffectofacupuncturalandmoxibustionaltherapyontheapoptosisofbreastcellMCF7【ABSTRACT】Objective:ToobservetheeffectontheapoptosisofbreastcancercellMCF7oxibustionaltherapy.Methods:ZusanliandSanyinjiaoneigua

3、ninbothsidesoffemaleCF7cell.Todetectethecytoxicityetryafter72hours.Results:TheFasexpressionarkably.Theinhibitionratearkablyhigherthanthecontrolgroup(P＜0.05).Conclusion:AcupuncturalandmoxibustionalserumcouldincreaseFasexpressionratetoinhibitproliferationofMCF7cella

4、ndinduceitsapoptosis.【KEYoxibustionBreastNeoplasmsApoptosisCellcycle乳腺癌在我国的发病率不断增高，寻找有效的治疗方法具有深远的意义［1］。针灸在一定程度上能抑制肿瘤的生长.freelingen公司产品，由北京岳泰生物公司提供。FACScan型流式细胞仪为美国BD公司产品。1.2方法1.2.1针灸血清的制备［1］选用雌性健康ODELD68051型电针治疗仪，选用连续波，留针20min。艾灸组用雀琢灸法灸穴位20min，连续6d，每天2次，在最后一次治疗结束后

5、1h，乙醚吸入麻醉，腹主动脉取血，无菌分离血清，经56℃、30min灭活处理后，置-20℃冰箱备用。1.2.2细胞培养MCF7细胞株培养于RPMI1640培养液中，置37℃，5%CO2（体积比，下同）和饱和湿度下的培养箱中培养，2~3d胰酶消化传代1次，当细胞传至第4代、细胞生长良好、状态稳定时，用胰蛋白酶消化后，以2×105/cm2的密度重新种入30mm的6孔培养皿上，于37℃和5%CO2培养箱中培养24h。第2天用磷酸盐缓冲溶液（PBS）将细胞清洗2次，分别加入正常鼠血清、电针鼠血清、电针鼠血清继续培养72h。1.2.

6、3MTT法检测MCF7细胞抑制率取对数生长期的MCF7细胞，胰酶分散计数，用RPMI1640培养液调整细胞浓度为1×105/ml，按每孔200μl接种于96孔板中（每孔细胞数为2×104个），置于37℃、5%CO2和饱和湿度下的培养箱中培养24d，贴壁后倒掉RPMI1640培养液，分为对照组和实验组，每一组设3个平行孔，分组如下：对照组（RPMI1640培养液中含10%正常鼠血清），电针组（RPMI1640培养液中含10%电针鼠血清），艾灸组（RPMI1640培养液中含10%艾灸鼠血清）。每一组分别加入血清200μl，再置

7、培养箱中分别培养12h、48h、72h后，每孔加入5mg/mlMTT20μl，继续培养4h后，终止培养。小心吸弃孔内培养上清液，每孔加入二甲基亚砜150μl，振荡至结晶完全溶解，于酶联免疫检测仪上测定490nm波长的吸光度（A值），计算抑制率，由抑制率说明针灸血清对人乳腺癌MCF7细胞株的敏感性。抑制率（%）=（对照组A值-含药血清组A值）/对照组A值×100%。1.2.4流式细胞仪检测细胞凋亡和细胞周期变化取对数生长期的细胞，用0.25%胰酶消化经加入以上各组血清培养72h后的贴壁细胞，收集细胞数目分别约5×105，10

8、00r/min离心5min，弃去培养液。经PBS漂洗2次后，加入冰预冷的70%乙醇固定，4℃过夜。然后除去固定液，用3mlPBS溶液重悬细胞5min，1000r/min离心5min，弃去PBS溶液，加入PC缓冲液50μl，静置20min，再加入100μg/mlPI液10μl，PBS溶液480μl，室温避