脂氧合酶抑制剂ndga对乳腺癌mcf

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1、脂氧合酶抑制剂NDGA对乳腺癌MCF【摘要】目的：探讨NDGA对乳腺癌MCF7细胞VEGF和CD44V6表达的影响。方法：将乳腺癌MCF7细胞系培养至对数生长期，分别以0、1、10、100μmol/L的NDGA处理48h后，RTPCR法检测细胞VEGFmRNA的表达水平，流式细胞仪检测细胞CD44V6的表达情况。结果：在1、10、100μmol/L的NDGA作用下，3组VEGFmRNA和CD44V6的表达显著低于对照组（F=2996.13,P＜0.001;F=3435.08,P＜0.001）。结论：NDGA明显下调MCF7细胞VEGFmRNA和CD44V6的表达，抑制肿瘤细胞的侵袭

2、转移能力。【关键词】乳腺肿瘤・脂氧合酶抑制剂・CD44V6・VEGFTheeffectoflipoxygenaseinhibitor(NDGA)ontheexpressionofVEGFandCD44V6inbreastcancerMCF7cells【ABSTRACT】Objective:ToexploretheeffectsofVEGFandCD44V6onbreastcancerMCF7cellsbyNDGA.Methods:MCF7cellsinthelogarithmicgroeasured.Thereol/L)intheexper

3、iment.After48htreatmentofNDGA,theexpressionofVEGFmRNAeasuredbyRTPCRandtheexpressionofCD44V6inedbyfloetry.Results:AftertreatmentofNDGA,theexpressionsofVEGFmRNAandCD44V6inNDGAgroupsetastasisonMCF7cellsbymeansofthedoRNAandCD44V6.【KEYCF7细胞端粒酶hTERTmRNA及bcl2表达，进而抑制细胞增殖，诱导细胞凋亡［2］。本文以VEGF和CD44V6为侵袭转移指

4、标，探讨NDGA对乳腺癌MCF7细胞侵袭和转移能力的影响。1材料和方法1.1细胞系和材料乳腺癌细胞系MCF7由山东大学细胞生物学教研室惠赠。VEGF引物序列：上游引物5’TTGCTGCTCTCTACCTCCAC3’下游引物5’AATGCTTTCTCCGCTCTG3’扩增片段长度为418bp。βactin作为内参照：上游引物5’GTGGGGCGCCCCAGGCACCA3’下游引物5’CTCCTTAATGTCACGCACGATTTC3’扩增片段长度为539bp。上述引物均由上海博亚生物工程有限公司合成。RNA提取试剂盒、dNTP、RNasin、MMLV逆转录酶及TaqDNA聚合酶，均购

5、自于上海生工生物公司。1.2方法1.2.1细胞培养与处理MCF7细胞培养于含10%小牛血清的RPMI1640培养基中，青霉素、链霉素浓度均为100U/ml，NaHCO3为2g/L，置于37℃、5%CO2的湿化培养箱，在25cm2/50ml一次性塑料培养瓶中进行传代培养。NDGA处理组浓度分别为0、1、10、100μmol/L，共4组。将处于对数生长期且长满瓶底80%~90%的MCF7细胞用0.25%胰蛋白酶进行消化，待细胞形态变圆、体积变小时倒掉胰蛋白酶，加入含血清的培养液终止消化，轻轻吹打制成单细胞悬液，分装于多个培养瓶，补足培养液继续培养24h，取4组生长良好的细胞，倒掉培养液

6、，处理组各加入NDGA浓度分别为1、10、100μmol/L的培养液5ml，对照组补足培养液。继续培养48h，消化离心收集标本待检。1.2.2RTPCR法分析VEGFmRNA的表达将各浓度NDGA处理48h和未处理的细胞消化后离心（1000r/m,5min），PBS洗涤后再离心一次，弃上清，收集细胞置于-80℃保存备用。应用异硫氰酸胍一步法提取总RNA，然后进行逆转录反应和PCR反应，对凝胶电泳结果进行定量分析，计算相对系数。相对系数=VEGFmRNA表达强度/βactin表达强度。根据相对系数作统计学分析及直方图，计算VEGFmRNA抑制率=（对照组-治疗组）/对照组×100%。

7、1.2.3流式细胞仪检测CD44V6的表达将各浓度NDGA处理48h和未处理的单细胞悬液放入离心管离心（1500r/m，5min），PBS漂洗后再离心5min，弃上清，加入70%冷乙醇2ml移入EP管，4℃固定。调节细胞悬液的浓度为106~107/ml，取两支试管各加待测细胞悬液500μl，其中一管加20μl单抗CD44V6FITC工作液，另一管加20μl阴性对照单抗IgG1FITC工作液，均置于室温下避光20min，2000r/min离心5min，去上清，加入PBS