过表达maspin对人乳腺癌MCF-7细胞凋亡的影响.pdf

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1、第29卷第5期天津科技大学学报V_01．29NO．52014年10月JournalofTianjinUniversityofScience&Technology0ct．2014DOI：10．13364~．issn．1672—6510．2014．05．005过表达maspin对人乳腺癌MCF一7细胞凋亡的影响李艳琦，张同存，孙雪光，廖兴华，王楠，罗学刚(天津科技大学生物工程学院，天津300457)摘要：通过构建maspin表达质粒，在人乳腺癌MCF．7细胞中过表达maspin，研究maspin对MCF-7细胞增殖率及凋亡率的影响．MTT检测

2、实验表明，过表达maspin能够剂量依赖性抑制MCF．7细胞的增殖率．采用TUNEL法和流式细胞术检测maspin对MCF．7细胞凋亡的影响，结果表明过表达maspin可促进MCF-7细胞凋亡进而抑制其增殖．关键词：乳腺癌；MCF．7细胞；maspin；凋亡中图分类号：R737．9文献标志码：A文章编号：1672-6510(2014)05-0020-04EffectofoVerexpressingMaspinontheApoptosisofHumanBreastCancerCellMCF．7LIYanqi，ZHANGTongcun，SUN

3、Xueguang，LIAOXinghua，WANGNan，LUOXuegang(CollegeofBiotechnology。TianjinUniversityofScience&Technology，Tianjin300457，China)Abstract：Byconstructingmaspinexpressionplasmid，theefectsofoverexpressedmaspinontheproliferationandapoptosisofhumanbreastcancercellMCF．7werestudied．Thep

4、roliferationofMCF．7cellswasobservedwiu1MTTheresultsshowthattheoverexpressionofmaspininhibitedMCF-7cell’Sproliferationinadosedependentmanner．The印Op—tosisofMCF．7cellsWaSobservedwithTUNELandflowcytometry,TheresultsindicatethatthemaspinoverexprssioncouldpromotetheapoptosisofM

5、CF一7cellandtherebyinhibitcellularproliferation．Keywords：breastcancer；MCF一7cells；maspin；apoptosis乳腺癌是具有高发率和死亡率的恶性肿瘤之一[11．津康源生物技术有限公司；空载质粒pcDNA3．1，本乳腺癌的发生和发展是多基因突变的结果，这包括原实验室保藏；FastPfuDNA聚合酶、质粒抽提试剂癌基因的激活和抑癌基因的失活L2J．maspin是一种盒，北京全式金生物技术有限公司；gpnI限制性内新型的非经典丝氨酸蛋白酶抑制剂，作为一个肿瘤抑切酶、

6、XhoI限制性内切酶、T4DNA连接酶、制基因，它能在体内抑制肿瘤的生长和迁移[3-4]．DeadEnda~荧光测定TUNEL系统，Promega生物技maspin已经被证明能够抑制细胞运动性、侵袭和迁术有限公司；M—MLV逆转录酶、Turbo转染试剂、移p．然而，maspin对细胞增殖和凋亡的影响还没Trizol裂解液，上海英骏生物技术有限公司；胶回收有被研究清楚．本文构建了maspin的表达质粒，探索试剂盒、DM2000PlusDNAMarker，北京康为世纪生过表达maspin对MCF一7细胞增殖和凋亡的影响，这物科技有限公司；ma

7、spin一抗，Abcam公司；MTT，将为maspin在乳腺癌治疗方面的应用提供理论基础．北京索莱宝科技有限公司；AnnexinV细胞凋亡检测试剂盒，天津三箭生物技术有限公司．1材料与方法1．2细胞株和细胞培养1．1主要试剂人乳腺癌细胞株MCF一7细胞为本实验室保DMEM低糖培养基，Gibico公司；胎牛血清，天藏．在含体积分数10％灭活胎牛血清的DMEM低糖收稿日期：2013—12~35；修回日期：2014-03—12基金项目：国家自然科学基金资助项目(31071126，31000343)作者简介：李艳琦(1989一)，男，天津人，硕士

8、研究生；通信作者：张同存，教授，tony@rust．edu．cn．2014年l0月李艳琦，等：过表达maspin对人乳腺癌MCF一7细胞凋亡的影响·21·培养液中，于37℃、CO2体积分数5％